發(fā)布時(shí)間：2021-12-02 19:27

　　目的:膠質(zhì)瘤現(xiàn)在被認(rèn)為是一種遺傳和表觀遺傳疾病,預(yù)后較差。MicroRNA（miRNA）的遺傳變異被認(rèn)為是膠質(zhì)瘤發(fā)生的重要潛在危險(xiǎn)因素。方法:1、使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn),檢測(cè)在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤臨床組織樣本和非腫瘤腦腦組織中microRNA-586（miR-586）的表達(dá)水平,以及檢測(cè)miR-586在膠質(zhì)瘤細(xì)胞株和人正常星形膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)水平;2、使用CCK-8、平板克隆、流式細(xì)胞術(shù)和EdU實(shí)驗(yàn),檢測(cè)抑制miRNA-586后對(duì)U87細(xì)胞的生物學(xué)影響;3、通過miRNA靶基因在線預(yù)測(cè)網(wǎng)站預(yù)測(cè)miR-586的下游靶基因,通過雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR-586在下游靶基因3’-UTR的結(jié)合位點(diǎn),以確認(rèn)SFRP1是否是miR-586的直接靶標(biāo),Western blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抑制miR-586后對(duì)下游靶基因SFRP1表達(dá)的影響;4、在下調(diào)miR-586的U87細(xì)胞株中共轉(zhuǎn)染si-SFRP1,檢測(cè)抑制SFRP1能否減弱下調(diào)miR-586對(duì)U87細(xì)胞的生物學(xué)影響,并使用CCK-8、流式細(xì)胞術(shù)、EdU實(shí)驗(yàn)及Western blotting實(shí)驗(yàn)進(jìn)行分析;5、下調(diào)miR-586的U87細(xì)胞... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：45 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

qRT-PCR分析miR-586非腫瘤腦組織(NBTs)、膠質(zhì)瘤細(xì)胞瘤（GBM）組織中的表

26第3章實(shí)驗(yàn)結(jié)果瘤腦組織（圖1A）。同時(shí)，在正常人星形膠質(zhì)細(xì)胞（NHA）和5個(gè)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系中，進(jìn)一步驗(yàn)證miR-586的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)miR-586在U87細(xì)胞系中表達(dá)水平最高（圖1B）。這些研究表明，miR-586在膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞中顯著高表達(dá)。為了明確膠質(zhì)瘤腫瘤生物過程中miR-586的潛在作用，使用DAVID在線網(wǎng)站工具（https://david.ncifcrf.gov/）和KEGG通路分析。如韋恩圖所示（圖3A），總共收集了交集大于3數(shù)據(jù)庫(kù)的1905個(gè)基因，然后使用DAVID在線分析1905個(gè)基因，收集基因相關(guān)通路并使用KEGG通路富集分析，發(fā)現(xiàn)miR-586的靶基因主要與“癌癥通路”，“Wnt信號(hào)通路”和“Focal粘附”信號(hào)通路相關(guān)（圖1C）。3.2體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-586對(duì)膠質(zhì)瘤功能的影響圖2(A)qRT-PCR分析轉(zhuǎn)染miR-586inhibitor或miR-NC質(zhì)粒后U87細(xì)胞中miR-586的表

29第3章實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖4(A)Westernblotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-586inhibitor和si-SFRP1共轉(zhuǎn)染U87細(xì)胞后SFRP1的表達(dá)。GAPDH作為內(nèi)參。(B)CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-586inhibitor和si-SFRP1共轉(zhuǎn)染U87細(xì)胞后的細(xì)胞增殖能力。(C)EdU檢測(cè)miR-586inhibitor和si-SFRP1共轉(zhuǎn)染U87細(xì)胞后的細(xì)胞增殖能力。(原放大倍數(shù)，200×)。(D)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)miR-586inhibitor和si-SFRP1共轉(zhuǎn)染U87細(xì)胞后的細(xì)胞周期階段。（*代表與miR-NC+Vector組對(duì)比，#代表與3.4SFRP1可減弱miR-586對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的促癌作用

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院敘事醫(yī)學(xué)課程教學(xué)經(jīng)驗(yàn)探索[J]. 李飛.  醫(yī)學(xué)與哲學(xué). 2019(15)
[2]暈厥的診斷及臨床評(píng)估[J]. 陶貴周,蔡宏宇.  醫(yī)學(xué)與哲學(xué)（B）. 2015(09)
[3]秦皮素體外抗乳腺癌作用與雌激素信號(hào)通路的關(guān)系[J]. 霍洪楠,謝鯤鵬,王麗夢(mèng),姜英,鄒偉,謝明杰.  生理學(xué)報(bào). 2013(03)
[4]加強(qiáng)高校財(cái)務(wù)管理,提高教育投資效益[J]. 賈明霞.  科技信息. 2008(35)



本文編號(hào)：3529050