目的:探討LUCAT1與Beclin1的關(guān)系及其在調(diào)控肺腺癌A549干細(xì)胞干性中的作用。方法:1.通過無血清懸浮培養(yǎng)法富集肺腺癌A549干細(xì)胞,采用FCM檢測(cè)CD44⁺和CD133⁺標(biāo)記細(xì)胞比例。2.采用克隆形成實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)A549-MN及A549-SC的生物學(xué)功能。3.通過qRT-PCR、WB和TEM觀察A549-MN及A549-SC的干性及自噬水平。4.觀察敲低或過表達(dá)Beclin1后A549-SC的自噬泡數(shù)量變化、功能變化及干性變化。5.通過基因芯片技術(shù)對(duì)A549-MN和A549-SC之間差異表達(dá)的LncRNA進(jìn)行大規(guī)模篩選并采用qRT-PCR驗(yàn)證。6.檢測(cè)敲低或過表達(dá)LUCAT1后A549-SC的Beclin1表達(dá)量及生物學(xué)功能變化。7.采用qRT-PCR及WB檢測(cè)敲低或過表達(dá)LUCAT1后A549-SC的自噬及干性水平。結(jié)果:1.A549-SC中CD44⁺和CD133⁺標(biāo)記細(xì)胞率（13.77±2.43%）高于A549-MN（1.50±0.24%）（P<0.... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

假說圖本研究首先明確肺腺癌A549細(xì)胞和A549干細(xì)胞的自噬水平，再通過敲低/過表達(dá)自噬關(guān)鍵基因Beclin1來檢測(cè)干性水平以明確Beclin1在維持肺癌干細(xì)胞干性中的作用

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文劉長路223結(jié)果3.1懸浮干細(xì)胞誘導(dǎo)A549-MN在10%FBS的1640培養(yǎng)液中呈梭形貼壁生長（圖1a），而在含各種誘導(dǎo)因子的無血清培養(yǎng)基中，細(xì)胞3~5d后可形成形態(tài)較小的懸浮球，分散于培養(yǎng)瓶內(nèi)，未成球的單個(gè)細(xì)胞逐漸凋亡（圖1b），7~10d后，細(xì)胞團(tuán)數(shù)目增多，直徑增大，形態(tài)趨于球形，有一定的折光性（圖1c）。傳代培養(yǎng)第15天后可見微球體體積明顯增大，球內(nèi)細(xì)胞結(jié)合更加緊密且形態(tài)越趨于球形，可以穩(wěn)定傳代（圖1d）。表明無血清懸浮培養(yǎng)法能富集具有自我更新能力的人肺腺癌A549干細(xì)胞。圖1：顯微鏡下A549細(xì)胞生長（×200倍，標(biāo)尺=50μm）a：A549貼壁生長b：A549用SFM培養(yǎng)第5dc：A549用SFM培養(yǎng)第10dd：A549用SFM培養(yǎng)第15d3.2A549-SC中CD44+和CD133+標(biāo)記細(xì)胞CD44及CD133是肺癌干細(xì)胞重要的表面標(biāo)志物，F(xiàn)CM結(jié)果顯示，A549-SC中CD44+和CD133+標(biāo)記細(xì)胞率（13.77±2.43%）高于A549-MN（1.5±0.24%）（P<0.01），表明無血清懸浮培養(yǎng)法富集的A549-SC具有較高的干細(xì)胞成分，見圖2、表1。

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文劉長路23圖2：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD44+和CD133+標(biāo)記細(xì)胞比例a.流式圖b.半定量分析表1：A549-MN和A549-SC中CD44+和CD133+細(xì)胞比例（x±s，n=3）注：**表示與A549-MN相比，P<0.053.3A549-SC克隆形成能力克隆形成能力也是LCSCs重要的生物學(xué)特性，可反映細(xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個(gè)重要性狀。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，A549-SC的克隆形成數(shù)（95.67±11.26個(gè)/平皿）比A549-MN（63.67±6.55個(gè)/平皿）增多，P<0.05，表明A549-SC的克隆形成能力較A549-MN增強(qiáng)，見表2、圖3。表2：A549-MN和A549-SC的克隆形成數(shù)（x±s，n=3）注：*表示與A549-MN相比，P<0.05組別CD133+和CD44+比例（%）A549-MN1.50±0.24A549-SC13.77±2.43**組別克隆形成數(shù)（個(gè)）A549-MN63.67±6.55A549-SC95.67±11.26*

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Molecular modulation of autophagy: New venture to target resistant cancer stem cells[J]. Harpreet K MANDhair,Miroslav Arambasic,Urban Novak,Ramin Radpour.  World Journal of Stem Cells. 2020(05)
[2]自噬基因Beclin1在人肺腺癌A549細(xì)胞系SP及非SP細(xì)胞亞群中的表達(dá)[J]. 趙星,趙松,楊洋.  中國老年學(xué)雜志. 2012(12)



本文編號(hào)：3524357