【目的】炎癥反應在腦缺血再灌注損傷過程中起著重要作用。在以往的研究中,我們證明了合適濃度的尿酸（uric acid,UA）具有抗氧化作用,可以減少炎癥反應,防止神經(jīng)細胞嚴重損傷。然而,關于尿酸在腦缺血再灌注損傷過程中的保護機制目前尚不明確。本研究旨在探討尿酸在體外缺血再灌注模型中的保護機制�！痉椒ā课覀兝眯∈蠛ｑR神經(jīng)元（HT22細胞）在體外構建氧糖剝奪再灌注（Oxygen-glucose deprivation reperfusion,OGD/R）模型模擬缺血再灌注模型,我們將小鼠海馬神經(jīng)元分為6組,分別為:對照組、OGD組、OGD/R組、OGD/R+HMGB1 si RNA組、OGD/R+尿酸組和OGD/R+尿酸+HMGB1蛋白組。我們使用蛋白免疫印跡法（Western blotting）檢測HMGB1、TLR4、NF-κB-p65和磷酸化NF-κB-p65（p-NF-κB-p65）蛋白的表達情況。我們采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法（MTT）檢測6組中HT22的細胞活力。同時,我們采用流式細胞學的方法檢測6組中HT22的細胞凋亡情況。除此之外,我們采用ELISA法檢測細胞培養(yǎng)基... 

【文章來源】：廣州醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

在缺氧/再灌注模型中，300μM的UA誘導的細胞存活率增加

廣州醫(yī)科大學碩士學位論文24組和OGD/R+尿酸+HMGB1組中，OGD/R組中細胞核和細胞質的HMGB1蛋白表達量顯著上調(與對照組相比，相對表達量分別為1.6和1.8，P<0.05)，但OGD組僅能顯著上調胞漿HMGB1蛋白表達(P<0.05)(圖2)。UA或HMGB1siRNA轉染處理不影響OGD/R期間HMGB1在細胞核內的表達(與OGD/R組相比，P>0.05)，但能顯著下調胞漿HMGB1蛋白的表達(P<0.05)(圖2C)。因此，UA可能在OGD/R過程中抑制HT22細胞核HMGB1乙�；良毎|，從而起調控作用。圖2在OGD/R過程中，使用UA處理HT22細胞24h后HMGB1在細胞質和細胞核中的分布。A、采用Westernblotting檢測不同組處理后的HMGB1在細胞質和細胞核中的表達。B、在OGD/R過程中，6組中細胞核內的HMGB1表達水平的定量比較。C、在OGD/R過程中，6組中細胞質的HMGB1表達水平的定量比較。*與對照組比較，P<0.05，表示有統(tǒng)計學意義。4．尿酸可以抑制HT22細胞OGD/R中HMGB1/TLR4/NF-κB通路為了進一步研究尿酸是如何通過HMGB1發(fā)揮作用的，我們研究HMGB1下游TLR4的蛋白表達。我們的實驗數(shù)據(jù)顯示：在對照組、OGD組、OGD/R組、OGD/R+HMGB1siRNA組、OGD/R+尿酸組和OGD/R+尿酸+HMGB1組中，OGD/R組能顯著上調TLR4的表達(與對照組相比，相對表達水平為1.75，P<0.05)，但加入UA或HMGB1siRNA轉染處理后TLR4的上調表達不明顯(P>0.05)，而加入HMGB1蛋白處理后可以觀察到TLR4的表達上調（P<0.05）(圖3A，B)。因此，我們認為UA通過調節(jié)HMGB1/TLR4通路發(fā)揮保護作用。通常情況下，HMGB1/TLR4通路可以激活NF-κB，我們研究了TLR4的下游蛋白的表達情況。我們的實驗數(shù)據(jù)顯示：OGD和OGD/R可以上調NF-κB-p65和p-NF-κB-p65的表達(P<0.05)；加入UA或HMGB1siRNA轉染處理后可以抑制OGD/R的NF-κB-p65和p-NF-κB-p65上調的作用(圖3A，B)。?

廣州醫(yī)科大學碩士學位論文26圖3在OGD/R過程中，UA可以抑制TLR4/NF-κB通路的激活，減少炎癥因子的水平。A、采用Westernblotting檢測不同組處理后HT22細胞內的TLR4、NF-κB-p65和p-NF-κB-p65的表達。B、在OGD/R過程中，不同處理后HT22細胞內TLR4、NF-κB-p65和p-p65的表達水平定量比較。C、在OGD/R過程中，采用ELISA法檢測培養(yǎng)液上清中炎癥因子腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的水平；D、在OGD/R過程中，采用ELISA法檢測培養(yǎng)液上清中炎癥因子白細胞介素-1(IL-1)β和白細胞介素-6（IL-6）的水平。*與對照組比較，P<0.05，表示有統(tǒng)計學意義。6．在OGD/R模型中，尿酸可以提高HT22細胞活力并抑制細胞凋亡在對照組、OGD組、OGD/R組、OGD/R+HMGB1siRNA組、OGD/R+尿酸組和OGD/R+尿酸+HMGB1組中，我們的結果表明，與OGD/R組相比，UA和

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Overexpression of HMGB1 A-box reduced lipopolysaccharide-induced intestinal inflammation via HMGB1/TLR4 signaling in vitro[J]. Fu-Cai Wang,Jing-Xuan Pei,Jun Zhu,Nan-Jin Zhou,Dong-Sheng Liu,Hui-Fang Xiong,Xiao-Qun Liu,Dong-Jia Lin,Yong Xie.  World Journal of Gastroenterology. 2015(25)



本文編號：3519628