實驗一微管蛋白折疊輔助因子B（TBCB）在星形膠質(zhì)細(xì)胞突起形成中的作用及機(jī)制研究目的:探討微管蛋白折疊輔助因子B（Tubulin folding cofactors B,TBCB）在星形膠質(zhì)細(xì)胞中的作用、作用機(jī)制及調(diào)控機(jī)制。從TBCB對神經(jīng)系統(tǒng)中星形膠質(zhì)細(xì)胞（星膠細(xì)胞）的微管生物合成及動態(tài)平衡調(diào)節(jié)的角度入手,揭示TBCB在星膠細(xì)胞及其突起生長發(fā)育過程中的作用及機(jī)制,為臨床提供理論基礎(chǔ)。方法:實驗分為三個部分,第一部分實驗:研究TBCB在星形膠質(zhì)細(xì)胞突起形成中的作用。原代培養(yǎng)小鼠星膠細(xì)胞,分別給與星膠細(xì)胞急、慢性酒精暴露,以及siRNA TBCB沉默處理。用Cell Counting Kit-8（CCK8）檢測慢性酒精暴露對星膠細(xì)胞的活性影響。在免疫熒光（Immunoflourescent,IF）實驗中,用多聚甲醛固定星膠細(xì)胞,保持細(xì)胞膜完整,檢測胞漿內(nèi)溶解的及與骨架蛋白結(jié)合的蛋白。用α-微管蛋白（α-tubulin,α-T）標(biāo)記微管（MT）的形態(tài)變化,觀察在不同的刺激下,TBCB與MT的表達(dá)變化,以及星膠細(xì)胞的形態(tài)變化,研究TBCB對微管的作用及該機(jī)制對星膠細(xì)胞突起生長的影響。用定量逆... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

星形膠質(zhì)細(xì)胞的鑒定Fig1Identificationofastrocytes

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文52附圖圖1星形膠質(zhì)細(xì)胞的鑒定Fig1Identificationofastrocytes圖A為原代提取的星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)7天后IF檢測GFAP；圖B為第三代的星形膠質(zhì)細(xì)胞IF檢測GFAP。標(biāo)尺=100um。圖2急性酒精暴露后TBCB對星形膠質(zhì)細(xì)胞突起生長的影響Fig2EffectsofTBCBonthegrowthanddevelopmentofastrocytesprotrusionafteracutealcoholexposure圖A為IF檢測α-tubulin（紅）、TBCB（綠）在急性酒精暴露（100mM）0、1、6、12、24h后星膠內(nèi)的表達(dá)變化情況，同時顯示了細(xì)胞微管和突起的改變。A1-3為正常星膠細(xì)胞對照組（Con），A4-6為急性酒精暴露1h,A7-9為急性酒精暴露6h,A10-12為急性酒精暴露12h,A13-15為急性酒精暴露12h。圖B為WB檢測α-tubulin、TBCB蛋白表達(dá)變化和相對定量分析。與對照組相比，p<0.05。標(biāo)尺=50um。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文53圖3慢性酒精暴露后TBCB對星形膠質(zhì)細(xì)胞生長的影響Fig3EffectsofTBCBongrowthanddevelopmentofastrocytesprotrusionafterchronicalcoholexposure圖A為IF檢測α-tubulin（紅）、TBCB（綠）在慢性酒精暴露（0、30mM、100mM）7d后星膠內(nèi)的表達(dá)變化，同時顯示了細(xì)胞微管和突起的改變。A1-A6為星膠細(xì)胞正常對照組（Con），其中A4-6為A1-A3中方框1-3位置的放大圖；A7-12為慢性酒精暴露組（30mM），其中A10-12為A7-A9中方框4-6位置的放大圖；A13-18為慢性酒精暴露組（100mM），其中A16-18為A13-A15中方框7-9位置的放大圖。圖B為慢性酒精暴露后CCK8檢測酒精對細(xì)胞活性的影響。圖C為WB檢測α-tubulin、TBCB蛋白表達(dá)變化和相對定量分析。圖D為qRT-PCR檢測TBCBmRNA表達(dá)變化。與對照組相比，p<0.05。標(biāo)尺=20um。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]腦外傷后ERK信號通路調(diào)節(jié)AQP4及其錨定蛋白DG的表達(dá)[J]. 萬珊珊,馬佩瑩,徐進(jìn),楊美,邱國平,卓飛,許士葉,張杲黎,霍介超,巨宇燦,劉輝.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2019(08)
[2]p21-activated kinase signalling in pancreatic cancer: New insights into tumour biology and immune modulation[J]. Kai Wang,Graham S Baldwin,Mehrdad Nikfarjam,Hong He.  World Journal of Gastroenterology. 2018(33)



本文編號：3504441