研究目的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤（RB）是最常見的嬰幼兒原發(fā)性眼內(nèi)惡性腫瘤之一,化療是治療視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的一種常規(guī)療法,本研究旨在比較洛鉑和卡鉑對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞增殖、凋亡和腫瘤生長的療效影響。研究方法通過視網(wǎng)膜母細(xì)胞Y79建立體外細(xì)胞模型,并通過MTT法檢測洛鉑、卡鉑對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞（RB）增殖的影響,使用流式細(xì)胞術(shù)分析洛鉑、卡鉑對(duì)RB細(xì)胞周期的影響,Annexin v-FITC/碘化丙啶（PI）測定細(xì)胞凋亡比例,RNA-seq檢測使用洛鉑、卡鉑后RB細(xì)胞中關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄分子的表達(dá)分析,并對(duì)其基因表達(dá)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異性表達(dá)分析。進(jìn)一步通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)檢測洛鉑、卡鉑對(duì)RB細(xì)胞中E2F1/Cdc25a/Cdk2基因表達(dá)的影響。利用視網(wǎng)膜細(xì)胞系Y79細(xì)胞構(gòu)建裸鼠視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤模型,將動(dòng)物荷瘤模型隨機(jī)分為4組,分別給予不同的給藥方案:第1組是對(duì)照組,第2組小鼠注射PBS,第3組小鼠注射卡鉑,第4組小鼠注射洛鉑,于第1/2/3/4周觀察腫瘤生長曲線,并在第4周后行病理檢查。研究結(jié)果體外試驗(yàn)中,卡鉑（80ug/ml）和洛鉑（40ug/ml）在體外能夠明顯抑制RB細(xì)胞的增殖;與卡鉑相比,洛鉑在早期... 

【文章來源】：廣州醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

卡鉑和洛鉑引起Y79細(xì)胞不同程度的凋亡和細(xì)胞周期變化

廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文18圖1.卡鉑和洛鉑引起Y79細(xì)胞不同程度的凋亡和細(xì)胞周期變化。卡鉑組（0、20、40、60和80μg/ml）（A）和洛鉑組（0、5、10、20和40μg/ml）在處理后第1、2、3天細(xì)胞活性評(píng)估（B）圖1C-E和G-I分別為NC組、卡鉑組和洛鉑組的流式代表性圖像。圖1F和J顯示，卡鉑組和洛鉑組細(xì)胞凋亡、S期細(xì)胞比例低于NC組。*，P<0.05;**,P<0.01;和***,P<0.0014.2卡鉑組和洛鉑組視網(wǎng)膜母細(xì)胞基因表達(dá)變化為了研究和探討洛鉑和卡鉑對(duì)RBY79細(xì)胞的影響，我們對(duì)不同組的mRNA進(jìn)行了RNA-seq測定(圖2A-C)。聚類分析顯示了三組之間的差異，因此我們能夠確認(rèn)，我們的RNA-seq數(shù)據(jù)證明了差異表達(dá)分析的條件是正確的（圖2D）。我們以差異轉(zhuǎn)錄本為研究對(duì)象進(jìn)行進(jìn)一步研究兩組樣本的差異，使用Ballgown對(duì)兩組樣本進(jìn)行比較，得到顯著的P值；在本分析中，兩組相比較進(jìn)行差異轉(zhuǎn)錄本篩選，篩選條件為p值<0.05和Foldchange大于1.2倍及小于0.83333倍，如對(duì)卡鉑組（圖3Aa）進(jìn)行對(duì)照組分析時(shí)，共鑒定出2525個(gè)表達(dá)上調(diào)的基因和1172個(gè)表達(dá)下調(diào)的基因，對(duì)洛鉑組（圖3Ab）進(jìn)行對(duì)照組分析時(shí)，共鑒定出2582個(gè)表達(dá)上調(diào)的基因和2971個(gè)表達(dá)下調(diào)的基因，對(duì)洛鉑組（圖3Ac）進(jìn)

4.結(jié)果19行對(duì)照組分析時(shí)，共鑒定出3724個(gè)表達(dá)上調(diào)的基因和2190個(gè)表達(dá)下調(diào)的基因。在基因本體論（GO）富集分析的幫助下，對(duì)這三組重要的生物學(xué)功能進(jìn)行了評(píng)估（圖3Ba-Bc），結(jié)果顯示E2F1/IGF1/CACNA1F/TNNC1/TGFB3CACNG6/MYBPC3CACNA2D3/ADCY1/PLN,E2F1/IGF1/NUPR1/HIST1H3J/HIST2H3CHIST2H3A/HIST1H3B/HIST1H3E/HIST1H3H/HIST1H3D和E2F1/MYC/CDKN2BHIPK4/CALML6組。在這份結(jié)果中值得我們關(guān)注的是E2F1蛋白在三組中表達(dá)均有顯著差異。圖2.卡鉑和洛鉑處理組的基因表達(dá)變化。NC組、卡鉑組和洛鉑組(A至C)相關(guān)基因的正常表達(dá)的熱圖。對(duì)每個(gè)樣本的基因表達(dá)水平(FPKM)進(jìn)行聚類分析的結(jié)果（D）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Lobaplatin inhibits growth of gastric cancer cells by inducing apoptosis[J]. Chu-Yang Yin,Xiao-Lin Lin,Lei Tian,Ming Ye,Xin-Ying Yang,Xiu-Ying Xiao.  World Journal of Gastroenterology. 2014(46)



本文編號(hào)：3489461