發(fā)布時間：2021-11-04 14:35

　　背景與目的:過去認為β細胞功能障礙主要源于β細胞的過早凋亡,但最近研究發(fā)現(xiàn)去分化是造成β細胞功能障礙的重要機制之一,且去分化造成的β細胞改變是可逆的。近年來多個臨床循證醫(yī)學研究發(fā)現(xiàn)腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）阻斷劑可降低糖尿病高危人群新發(fā)糖尿病發(fā)生率。申請者前期研究也發(fā)現(xiàn)RAS的主要效應物血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）可通過誘導β細胞凋亡、胰島局部炎癥及氧化應激等損害胰島β細胞,進而導致β細胞功能障礙及糖代謝紊亂,而作為AngⅡ生理性拮抗劑的血管緊張素（1-7）[Ang-（1-7）]可以降低糖尿病鼠胰島β細胞凋亡率、改善胰島局部炎癥、氧化應激及胰島素抵抗。但國內(nèi)外關(guān)于Ang-（1-7）對高糖誘導的胰島β細胞去分化的作用及機制尚不明確。本研究擬在探討Ang-（1-7）對高糖誘導的胰島β細胞病理性去分化的影響及可能機制,為糖尿病防治提供新靶點。方法:將小鼠胰島素瘤細胞（MIN6細胞）用RPMI-1640培養(yǎng)基[10%胎牛血清（FBS）、1%青鏈霉素混合液]于37℃、5%CO₂條件下常規(guī)傳代培養(yǎng)。根據(jù)實驗目的將細胞隨機分組為以下幾組:正常對照組、高糖組、高糖+Ang-（1-... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

各組MIN6細胞形態(tài)學變化

山西醫(yī)科大學碩士學位論文16a：NGgroup;b：HGgroup;c：HG+Ang-(1-7)group;d:HG+Ang-(1-7)+A779group;e:HG+Ang-(1-7)+PI3K3.2各組MIN6細胞上清液中胰島素濃度為了探討Ang-(1-7)對高濃度葡萄糖誘導的MIN6細胞胰島素分泌功能的影響，我們采用ELISA法檢測Ang-(1-7)干預前后胰島素分泌的變化。結(jié)果顯示：對照組、高糖組、高糖+Ang-(1-7)組胰島素濃度分別為53.5310.486ng/ml、112.5261.020ng/ml、138.2551.850ng/ml，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.005)。MIN6細胞在高糖刺激下，胰島素分泌較對照組顯著升高，可能是葡萄糖對MIN6細胞刺激作用，Ang-(1-7)干預后，胰島素分泌較高糖刺激組升高，提示Ang-(1-7)可改善高糖刺激的MIN6細胞胰島素分泌。圖2Ang-(1-7)對高糖誘導的MIN6細胞胰島素分泌功能的影響Figure2EffectofAng-(1-7)oninsulinsecretionofMIN6cellsinducedbyhighglucose*P＜0.05vs.NG組；#P<0.05vs.HG組*P＜0.05vs.NGgroup;#P<0.05vs.HGgroup3.3Ang-(1-7)對MIN6細胞特異性轉(zhuǎn)錄因子Pdx1、MafAmRNA以及去分化標記物Nanog、Oct4mRNA的影響

山西醫(yī)科大學碩士學位論文18圖3RT-PCR法檢測MIN6細胞分化成熟標記物Pdx1、MafAmRNA以及去分化標記物去Oct4、NanogmRNA的改變。Figure3RT-PCRanalysesforrelativeexpressionofmarkersofβcellsspecialidentity(Pdx1,MafA)andprogenitorlikecellsmarkers(Ngn3,Oct4)inMIN6cells．*P<0.05vs.Con組；#P<0.05vs.DM組；＆P<0.05vs.HG+Ang-（1-7）組。*P<0.05vs.Congroup;#P<0.05vs.DMgroup;&P<0.05vs.HG+Ang-(1-7)group.3.4Ang-(1-7)對MIN6細胞內(nèi)PI3K-Akt-FoxO1信號轉(zhuǎn)導通路的影響為探討Ang-(1-7)影響高糖誘導的MIN6細胞去分化的具體機制，我們通過Westernblot法檢測各組PI3K-Akt-FoxO1通路相關(guān)因子p-Akt、Akt、FoxO1、p-FoxO1的蛋白表達情況。結(jié)果顯示，與對照組相比，高葡萄糖刺激組（HG組）p-Akt、p-FoxO1蛋白表達水平顯著降低（均P<0.05），而Ang-(1-7)預處理后p-Akt、p-FoxO1水平明顯高于HG組（均P<0.05），但對Akt、FoxO1卻無明顯影響（P>0.05）。加入A779、LY492002則顯著抑制Ang-(1-7)介導的細胞內(nèi)p-Akt、p-FoxO1蛋白表達的增加（均P<0.05）（圖4,表2）。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]高糖通過下調(diào)FoxO1磷酸化誘導β細胞去分化[J]. 劉嬋,鄭曉雅,夏佳佳,任偉,李林蔓,劉蘭.  中國生物化學與分子生物學報. 2016(01)
[2]格列美脲起始治療對新診斷2型糖尿病患者的有效性和安全性:GREAT研究亞組分析[J]. 郭曉蕙,呂肖鋒,韓萍,張秀珍,楊華章,段文若,閻勝利,單忠艷,蘇青,陳莉明,杜建玲,宋欽華,彭永德,成興波,李啟富,田浩明,王堅,姬秋和,高妍.  中華內(nèi)分泌代謝雜志. 2012 (12)



本文編號：3475928