發(fā)布時間：2021-11-04 04:32

　　背景:中樞敏化是慢性偏頭痛（chronic migraine,CM）的潛在發(fā)病機制,并且與持續(xù)的神經(jīng)元過度興奮有關。興奮性氨基酸轉(zhuǎn)運體2（excitatory amino acid transporter 2,EAAT2）的功能障礙將突觸間隙內(nèi)谷氨酸的大量積累,使谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA）受體過度激活,從而導致突觸可塑性的增強而誘發(fā)中樞敏化。然而,星形膠質(zhì)細胞EAAT2在CM病理機制中的作用以及是否為CM的潛在治療靶點未知。因此,本研究旨在探討EAAT2在CM中樞敏化中的作用,并探索EAAT2表達增強劑LDN-212320對CM大鼠的治療潛力。方法:1.將雄性Sprague-Dawley大鼠通過連續(xù)7天的硬腦膜炎性湯（inflammatory soup,IS）輸注以構(gòu)建慢性偏頭痛大鼠模型。通過測量CM大鼠機械痛閾值和熱痛閾值的變化以及三叉神經(jīng)脊束尾核部位（trigeminal nucleus caudalis,TNC）降鈣素基因相關鈦（calcitonin gene-related peptide,CGRP）蛋白水平表達的變化來評... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

反復IS/PBS輸注后大鼠痛閾值和TNC部位CGRP表達的變化

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文29圖2.大腦TNC區(qū)域示意圖Fig.2SchematicrepresentationofthebrainregionforTNC.ThewhitedottedframerepresentstheTNCregionsandthewhitesolidlinerectangularboxintheTNCareaswereselectedfortheanalysisofastrocytes.NucleiwerelabeledwithDAPI(blue),andastrocyteswerelabeledwithGFAP(red).2.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計學分析使用SPSS22.0軟件進行統(tǒng)計學分析，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差形式表示。采用GraphPadPrism7軟件生成圖形，統(tǒng)計分析結(jié)果以箱型圖的形式呈現(xiàn)。在進行統(tǒng)計分析之前，使用Shapiro-Wilk（S-W）正態(tài)性檢驗來檢驗所有數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)性，并分別使用F檢驗或Bartlett檢驗方差齊性。使用SPSS軟件對數(shù)據(jù)進行Z評分檢驗以識別異常值，Z評分<-3或>3的數(shù)據(jù)被認為是異常值，在本研究中沒有數(shù)據(jù)被識別為異常值。行為學數(shù)據(jù)（機械痛閾值和熱痛閾值）采用雙向方差分析和Bonferroni事后檢驗進行評估。兩組數(shù)據(jù)間的差異采用獨立樣本T檢驗進行分析，兩組以上數(shù)據(jù)采用單因素方差分析和Bonferroni事后檢驗進行多重比較。P<0.05被認為具有統(tǒng)計學意義。

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文31圖3.EAAT2在TNC部位的表達及定位Fig.3ThelocalizationofEAAT2andtheexpressionlevelsintheTNC.a-b.EAAT2proteinexpressionintheTNCoftheCMgroupwasremarkablydecreasedcomparedtothatintheshamgroup.Proteinexpressioninthebargraphsisshownrelativetotheintensitybeta-actin/GAPDH.c.EAAT2mRNAexpressionintheTNCoftheCMgroupwasconsistentwithEAAT2proteinexpressionandwasalsosignificantlydecreased(n=6ratspergroup,*P<0.05comparedwiththeshamgroup).d.DoubleimmunofluorescencestainingofGFAP(green)withEAAT2(red)intheTNC.EAAT2wasmainlyexpressedonastrocytes(shownbyarrows)(n=3rats,5picturesperrats,scalebar=20μm).Thestatisticalanalysisresultswerepresentedinbox-plots,theboxdimensionshowsthemedianandinterquartilerange,thecenterlineshowthemedianandtheboxlimitsindicatethe25thand75thpercentilesandthewhiskersshowstheremaining50%ofthedatarange.4討論突觸間隙中低濃度的谷氨酸可確保傳入信號的正常傳輸。在我們的研究中，我們使用HPLC檢測了大鼠TNC部位中的谷氨酸濃度水平，其中，CM組大鼠谷氨酸濃度明顯高于sham組，這說明異常的谷氨酸濃度水平參與了CM的發(fā)病過程。EAAT2在清除細胞間隙谷氨酸和精確調(diào)節(jié)谷氨酸濃度方面起著至關重要的作用，q-PCR和Westernblots的結(jié)果顯示CM大鼠EAAT2mRNA和蛋白表達較sham組大鼠都顯著下調(diào)，這表明EAAT2的功能障礙可能是導致CM中樞敏化的關鍵因素。


本文編號：3475010