人血清白蛋白（HSA）主要由人體肝臟產(chǎn)生,是血漿中含量最豐富的蛋白質(zhì),其對(duì)維持機(jī)體正常功能,以及治療某些疾病具有重要作用。同時(shí)HSA還是許多疾病重要的生物指標(biāo)。對(duì)于HSA檢測(cè)的方法,主要有放射免疫法、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法、免疫濁度法等,很多方法往往都依賴于抗體與抗原的特異性結(jié)合,特別是應(yīng)用于復(fù)雜環(huán)境或者微量檢測(cè)時(shí),所使用的抗體更要具有穩(wěn)定、可靠的性質(zhì),才能實(shí)現(xiàn)對(duì)HSA準(zhǔn)確、特異、靈敏的檢測(cè)。因此,獲取特異性結(jié)合HSA的單克隆抗體（mAb）或其編碼基因,以對(duì)其進(jìn)行分析或者改造,對(duì)HSA檢測(cè)及相關(guān)疾病的診斷具有重要意義�？贵w可變區(qū)或全長(zhǎng)基因信息的獲取,對(duì)于進(jìn)行抗體工程和抗體功能鑒定分析至關(guān)重要。本研究開(kāi)發(fā)了一個(gè)完整的工作流程,使研究人員能夠從分泌抗HSA單克隆抗體的單個(gè)雜交瘤細(xì)胞中,準(zhǔn)確鑒定出mAb對(duì)應(yīng)的全長(zhǎng)重鏈與輕鏈免疫球蛋白（Ig）基因序列。主要內(nèi)容如下:利用Smart-seq2單細(xì)胞測(cè)序技術(shù),對(duì)雜交瘤細(xì)胞2F10進(jìn)行單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,并利用BASIC,rnaSPAdes,Igfinder等分析工具,對(duì)獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組拼接,經(jīng)過(guò)比對(duì)和篩選,最終從中分離出了一條重鏈和一條輕鏈（HC和L... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

cDNA文庫(kù)的生物分析儀電泳圖

第二篇研究?jī)?nèi)容第二章抗HSA單克隆抗體基因的驗(yàn)證及重組表達(dá)23圖1.1cDNA文庫(kù)的生物分析儀電泳圖Fig.1.1Bioanalyzerelectropherogramsofpre-amplifiedcDNAlibraries.圖1.2片段化后測(cè)序文庫(kù)的生物分析儀電泳圖Fig.1.2Bioanalyzerelectropherogramofasequencinglibraryaftertagmentation.1.3.2測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)控為了檢測(cè)測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量，使用MultiQC[123]生成數(shù)據(jù)質(zhì)量報(bào)告，此工具目的在于對(duì)于測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行快速準(zhǔn)確的質(zhì)量控制。相比于量化QC指標(biāo)的工具，MultiQC可以實(shí)現(xiàn)跨工具和大型樣本靈活整合，精準(zhǔn)評(píng)估整個(gè)項(xiàng)目的分析結(jié)果，

第二篇研究?jī)?nèi)容第二章抗HSA單克隆抗體基因的驗(yàn)證及重組表達(dá)24結(jié)果如圖1.3-1.6。如圖1.3，顯示所有數(shù)據(jù)中reads的長(zhǎng)度分布。在該圖中，橫軸為reads的長(zhǎng)度，縱軸為reads的數(shù)量。由于采用的是150bppaired-end測(cè)序。理論上，所有的reads長(zhǎng)度都應(yīng)落入150bp的位置。結(jié)果也很明顯，此次的測(cè)序數(shù)據(jù)中不存在較短或較長(zhǎng)reads，在測(cè)序長(zhǎng)度上沒(méi)有質(zhì)量問(wèn)題。圖1.3sequence長(zhǎng)度分布Fig.1.3Sequencelengthdistribution如圖1.4所示，此圖中表示每條序列的整個(gè)長(zhǎng)度上所測(cè)量GC含量，將其與GC含量的建模正態(tài)分布（綠色）進(jìn)行比較。圖中橫坐標(biāo)表示測(cè)序序列的GC含量（1-100%），縱軸則為對(duì)應(yīng)GC含量的序列讀數(shù)，即序列的數(shù)量多少。在正常的隨機(jī)庫(kù)中，期望是GC含量大致呈正態(tài)分布，其中心峰對(duì)應(yīng)于基礎(chǔ)基因組的總體GC含量。可以看到，在所獲得的數(shù)據(jù)中，有數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布（紅色）。首先，正態(tài)分布GC含量是根據(jù)觀察到的數(shù)據(jù)計(jì)算出來(lái)的，只于建立參考分布。不正常的分布可能表示庫(kù)受到污染或者有其他引起有偏差的因素出現(xiàn)。在樣本數(shù)據(jù)中，大部分?jǐn)?shù)據(jù)屬于正常范圍，超出理論范圍的數(shù)據(jù)可能是由于，某些偏好序列的大量擴(kuò)增。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]抗人血白蛋白單克隆抗體的制備及其免疫金標(biāo)試紙條的研制[J]. 李莉,任林柱,逄大欣,張英,歐陽(yáng)紅生.  中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志. 2007(11)



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