目的檢測親環(huán)素A（cyclophilin A,Cy PA）是否通過磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（m TOR）信號通路調(diào)控RAW264.7細胞自噬水平。方法體外培養(yǎng)RAW264.7細胞,分為空白對照組、Cy PA組（1 ng/m L,10ng/m L,100 ng/m L,500 ng/m L,1000 ng/m L）以明確Cy PA的最適濃度,培養(yǎng)24h后蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western Blot）檢測自噬相關(guān)蛋白LC3的表達;分空白對照組、Cy PA組（100 ng/m L）,加入Cy PA后繼續(xù)培養(yǎng)6h觀察Cy PA對各信號通路的影響,Western Blot檢測LC3,p-ERK,p-P38,p-JNK,p-PI3K,p-Akt,p-m TOR等蛋白的表達;分空白對照組、Cy PA組、LY294002組、Cy PA+LY294002組觀察PI3K/Akt/m TOR信號通路中各蛋白表達的變化,Western Blot檢測LC3,p-PI3K,p-Akt,p-m TOR等蛋白的表達。分別用免疫熒光顯微鏡、電鏡觀察RAW264.7細胞自... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1.研究背景
    1.2.本研究的目的、內(nèi)容
第二章 親環(huán)素A通過PI3K/Akt/mTOR信號通路調(diào)節(jié)RAW264.7細胞自噬水平
    2.1 材料
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑及耗材
        2.1.3 緩沖液及其他溶液
    2.2 方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 分組及細胞處理
        2.2.3 細胞蛋白提取及Western Blot
        2.2.4 GFP-RFP-LC3腺病毒感染，自噬小體的檢測
        2.2.5 電鏡觀察
        2.2.6 統(tǒng)計學方法
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 CyPA對RAW264.7 細胞自噬的影響呈時間和濃度依賴性
        2.3.2 CyPA處理的RAW264.7 細胞自噬小體形成增多
        2.3.3 CyPA對PI3K/Akt/mTOR，p-ERK，p-P38，p-JNK等信號通路的影響
        2.3.4 加入特異性的PI3K抑制劑LY294002對p-PI3K，p-Akt，p-mTOR蛋白表達的影響
    2.4 討論
第三章 結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術(shù)論文
致謝



本文編號：3439204