目的:分析臨床分離肺炎克雷伯菌XJ-K1和XJ-K2的耐藥特征、毒力特征、全基因組序列和克隆分型。比較5種中藥單體對(duì)菌株XJ-K1和XJ-K2的體外抗菌活性,并分析抗菌活性較好的中藥單體與抗生素聯(lián)合用藥效果。為臨床進(jìn)一步了解肺炎克雷伯菌特性,及正確使用抗生素和控制醫(yī)院感染提供科學(xué)依據(jù),同時(shí)也為尋找新的治療方案提供思路。方法:1.收集復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院北院分離的肺炎克雷伯菌XJ-K1和XJ-K2,采用微量肉湯稀釋法測(cè)定26種抗菌藥物對(duì)其的最低抑菌濃度（Minimum inhibitory concentration,MIC）。2.采用拉絲實(shí)驗(yàn)（String test）判定菌株XJ-K1和XJ-K2的高粘液表型。3.采用PCR（Polymerase chain reaction）)對(duì)菌株XJ-K1和XJ-K2進(jìn)行耐藥基因和毒力基因擴(kuò)增。4.采用多位點(diǎn)序列分型技術(shù)（Multilocus sequence typing,MLST）分析菌株XJ-K1和XJ-K2的ST型別。5.采用Illumina HiSeq 4000平臺(tái)和PacBio RSII平臺(tái)對(duì)菌株XJ-K1和XJ-K2進(jìn)行全基因組測(cè)序... 

【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

肺炎克雷伯菌XJ-K1和XJ-K216SrRNA基因擴(kuò)增結(jié)果

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文朱小奎252.4菌株XJ-K1和XJ-K2耐藥基因檢測(cè)結(jié)果為了解菌株XJ-K1和XJ-K2的耐藥機(jī)制，本研究通過(guò)PCR的方法擴(kuò)增31個(gè)肺炎克雷伯菌相關(guān)耐藥基因。結(jié)果顯示，耐藥基因blaTEM-1、blaKPC、blaSHV、rmtB在菌株XJ-K1和XJ-K2均檢出；而耐藥基因qnrS和tet(A)僅在菌株XJ-K2中被檢出。在兩菌株的染色體上均發(fā)現(xiàn)gyrA基因83位（Ser83Ile）和87位氨基酸（Asp87Gly）的突變，以及在parC基因80位氨基酸（Ser80Ile）的突變；這些基因已知的點(diǎn)突變與肺炎克雷伯菌對(duì)喹諾酮類藥物耐藥相關(guān)[46]。耐藥基因電泳結(jié)果見圖1-2。圖1-2肺炎克雷伯菌XJ-K1和XJ-K2耐藥基因擴(kuò)增結(jié)果2.5菌株XJ-K1和XJ-K2毒力因子檢測(cè)結(jié)果為了解菌株XJ-K1和XJ-K2是否存在高毒力相關(guān)基因，本研究通過(guò)PCR擴(kuò)增11個(gè)毒力基因。結(jié)果表明，菌株XJ-K1和XJ-K2均攜帶著高毒力相關(guān)基因iucABCD、iutA、rmpA和rmpA2,僅在菌株XJ-K2中檢測(cè)到iroN基因。毒力基因電泳結(jié)果見圖1-3。

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文朱小奎26圖1-3肺炎克雷伯菌XJ-K1和XJ-K2毒力基因擴(kuò)增結(jié)果結(jié)合拉絲實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及高毒力相關(guān)毒力基因檢測(cè)結(jié)果，判定菌株XJ-K1和XJ-K2為高毒力肺炎克雷伯菌[47]。2.6MLST分型結(jié)果為了解菌株XJ-K1與XJ-K2之間同源性，本研究通過(guò)PCR擴(kuò)增肺炎克雷伯菌7個(gè)管家基因，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定后（圖1-4）進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果在肺炎克雷伯菌MLST數(shù)據(jù)庫(kù)（https://bigsdb.pasteur.fr/klebsiella/klebsiella.htm）比對(duì)。結(jié)果顯示，肺炎克雷伯菌XJ-K1和XJ-K2均為ST11，是中國(guó)地區(qū)CRKP最主要的ST型[48]。其等位基因gapA、infB、mdh、pgi、phoE、rpoB和tonB編號(hào)為（3-3-1-1-1-1-4）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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