目的:通過建立藍(lán)光照射負(fù)載A2E的人RPE細(xì)胞光損傷模型,探索在此過程中A2E與藍(lán)光對人RPE細(xì)胞內(nèi)溶酶體及線粒體攝取、釋放Ca2+的影響。方法:原代培養(yǎng)人RPE細(xì)胞,將傳代至第四至第六代的細(xì)胞用于實驗。同一個體的同一代細(xì)胞用于相同的檢測指標(biāo),將細(xì)胞隨機分為五組:對照組、藍(lán)光光照組、藍(lán)光光照+硝苯地平組、負(fù)載A2E+藍(lán)光光照組、負(fù)載A2E+藍(lán)光光照+硝苯地平組;藍(lán)光光照強度（2000±500）Lux,時間6小時,光照結(jié)束后繼續(xù)培養(yǎng)24小時;光照前2小時加入終濃度為25 μM的A2E;光照前1小時加入終濃度為10-4M的硝苯地平。（1）使用CaTM-2AM結(jié)合胞漿內(nèi)的鈣離子,激光掃描共聚焦顯微鏡觀察每組RPE細(xì)胞的熒光變化并拍照,并通過軟件分析熒光強度（2）使用Rhod-2 AM結(jié)合線粒體內(nèi)的鈣離子,激光掃描共聚焦顯微鏡觀察各組線粒體鈣離子熒光情況并拍照,分析熒光強度（3）使用LysoTracker Red DND-99標(biāo)記人RPE細(xì)胞酸性溶酶體,Fluo-3 AM結(jié)合細(xì)胞內(nèi)的鈣離子,激光掃描共聚焦顯微鏡觀察并拍照,二者共定位后分析溶酶體內(nèi)鈣離子熒光強度（4）將細(xì)胞分為四組:對照組、藍(lán)光... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?人ＲＰＥ細(xì)胞??Ｆｉｇ．ｌ?Ｈｕｍａｎ?ＲＰＥ?ｃｅｌｌｓ??ｆｔ：?Ａ：．撼撫人ＲＰＥ細(xì)胞．（３?Ｂ：撩代人ＲＰＥ細(xì)：胞（７天＞?Ｃ：?Ｂ?３代人ＲＰＥ細(xì)胞

遵義醫(yī)科大學(xué)碩±學(xué)位論文＇?羅茂梅??２．２人ＲＰＥ細(xì)胞鑒定??對第３代人ＲＰＥ細(xì)胞用鼠抗人角蛋白抗體進(jìn)行免疫組化鑒定，ＲＰＥ細(xì)??胞胞漿呈棕黃色染色，為陽性染色（圖２）。??圖２人ＲＰＥ細(xì)胞角蛋白免疫化學(xué)染色（Ｘ１００）??Ｆｉｇ．２?Ｈｕｍａｎ?ＲＰＥ?ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ?ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?（ｘｌＯＯ）??注：細(xì)胞胞漿內(nèi)角蛋白呆棕黃色染色為陽性結(jié)果。??２．３各組ＲＰＥ細(xì)胞胞漿內(nèi)鈣離子熒光強度變化??激光共聚焦顯微鏡檢測各組ＲＰＥ細(xì)胞胞漿Ｃａ２＋結(jié)果顯示：胞漿鈣離子與??ＣａＴＭ－２ＡＭ結(jié)合后呈紅色熒光，各組熒光強度值、呈正態(tài)分布、方差齊，分別為??對照組（６０．２３５±０．３１８），藍(lán)光光照組（６６．５９７±０．２５０），藍(lán)光光照＋硝苯地平組??（６３．４７８±０．０８２），負(fù)載Ａ２Ｅ＋藍(lán)光光照組（７３．９４９±０．０７９），負(fù)載Ａ２Ｅ＋藍(lán)光光照＋硝??．苯地平組（６９．４４４±０．３６８），總體比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｆ＝１３４９．６９６，戶＜０．０５），??其中藍(lán)光光照組、藍(lán)光光照＋硝苯地平組、負(fù)載Ａ２Ｅ＋藍(lán)光光照組、負(fù)載Ａ２Ｅ＋藍(lán)光??光照＋硝苯地平組內(nèi)鈣離子熒光強度均高于對照組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜〇．〇５）；??藍(lán)光光照＋硝苯地平組內(nèi)熒光強度低于藍(lán)光光照組（尸＜〇．〇５），負(fù)載Ａ２Ｅ＋藍(lán)光光照??組、負(fù)載Ａ２Ｅ＋藍(lán)光光照＋硝苯地平組高于藍(lán)光光照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）；??負(fù)載Ａ２Ｅ＋藍(lán)光光照組、負(fù)載Ａ２Ｅ＋藍(lán)光光照＋硝苯地平組高于藍(lán)光光照＋硝苯地平組，??２１??

遵義醫(yī)科大學(xué)碩±學(xué)位論文＇?羅茂梅??差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜〇．〇５）；負(fù)載Ａ２Ｅ＋藍(lán)光光照組熒光強度高于負(fù)載Ａ２Ｅ＋藍(lán)??光光照＋硝苯地平組（＞Ｐ＜〇．〇５）。（見圖３，圖４，表１）??■■■??■??圖３各組ＲＰＥ細(xì)胞胞槳內(nèi)鈣離子熒光強度比較（Ｘ６００）??Ｆｉｇ．３?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｃａｌｃｉｕｍ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ?ｉｎ?ｃｙｔｏｐｌａｓｍ?ｏｆ?ＲＰＥ?ｃｅｌｌｓ??ｉｎ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ?（?ｘ?６００）??注：Ａ：對照組、Ｂ：藍(lán)光光照組、Ｃ：藍(lán)光光照＋硝苯地組、Ｄ：負(fù)載Ａ２Ｅ＋藍(lán)光光照組、Ｅ：負(fù)載Ａ２Ｅ＋??藍(lán)光光照＋硝苯地組。??表１各組ＲＰＥ細(xì)胞胞漿內(nèi)鈣離子熒光強度變化??Ｔａｂ．ｌ?Ｃｈａｎｇｅｓ?ｏｆ?ｃａｌｃｉｕｍ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ?ｉｎ?ｃｙｔｏｐｌａｓｍ?ｏｆ?ＲＰＥ?ｃｅｌｌｓ?ｉｎ?ｅａｃｈ??ｇｒｏｕｐ??分組?Ｎ?鈣離予熒光強度（Ｘ±Ｓ）??對照紙?３?６０．２３５±０．３１８??藍(lán)光光照組?３?６６．５９７±０．２５０Ａ??藍(lán)光光廳＋硝苯地平祖?３?６３．４７８±０．０８２“??負(fù)載Ａ２Ｅ＋籃光光照組?３?７３．９４９±〇．〇７９ｉ＊＞??負(fù)載Ａ２Ｅ＋藍(lán)光光照＋硝苯地平組?３?６９．４４４±〇．３６８＊＊＊＃??Ｆ?１３４９．６９６??Ｐ?０．０００??．．注：：各組間．比較，表屏■＇統(tǒng)計學(xué)：露義（Ｆ＝１３４９．６９６，戶＜０．〇５），▲ｉ５＜０．０５與對照｜１比較；＊Ｐ＜０．０５與藍(lán)光；光??照羾比較；？戶＜０．０５與藍(lán)光光照＋賴苯地肀組比較；：，＜０．０５與．負(fù)載Ａ２Ｅ＋


本文編號：3437542