本文關(guān)鍵詞：Gpr54在脂質(zhì)代謝中的生物學(xué)功能及其機(jī)理研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：作為一種慢性病,肥胖癥被世界衛(wèi)生組織認(rèn)為是目前人類最容易忽視,但發(fā)病率卻急劇上升的一種代謝紊亂癥。它被定義為明顯超重與脂肪層過厚,是體內(nèi)脂肪,尤其是甘油三酯積累過多而導(dǎo)致的一種病理狀態(tài)。脂質(zhì)代謝的紊亂直接導(dǎo)致肥胖的發(fā)生,其中涉及的最重要的組織器官就是肝臟和脂肪。全球藥物研發(fā)機(jī)構(gòu)針對(duì)肥胖進(jìn)行了各種靶向治療的小分子化合物研發(fā),其中G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)作為明星藥物靶點(diǎn)受到了很大的關(guān)注。本課題對(duì)GPCR視紫紅質(zhì)家族成員Gpr54(又名Kisslr)在脂質(zhì)代謝與肥胖的作用上進(jìn)行了一些初步探索,發(fā)現(xiàn)Gpr54在不依賴激素的情況下可以促進(jìn)脂肪細(xì)胞的分化從而促進(jìn)肥胖的發(fā)生發(fā)展。首先,本研究在動(dòng)物個(gè)體水平上分析了Gpr54敲除后小鼠的表型變化。我們發(fā)現(xiàn)通過去勢(shì)處理后,基因敲除型小鼠在高脂飼料喂養(yǎng)的過程中體重增長(zhǎng)比同窩野生型小鼠慢,但糖代謝水平?jīng)]有明顯變化。其次,我們?cè)诮M織水平上分析了Gpr54缺失對(duì)肥胖小鼠脂肪及肝臟的影響。Gpr54敲除導(dǎo)致小鼠的脂肪組織臟器系數(shù)偏低,脂肪細(xì)胞體積較小,肥胖引起的炎性反應(yīng)程度較弱。同樣,在肝臟組織中,Gpr54基因敲除型肥胖小鼠肝臟臟器系數(shù)比偏低,甘油三酯含量較少,肝臟的脂肪化程度減弱,此外Gpr54的配體Kp-10可刺激L02肝細(xì)胞系加速甘油三酯的合成。我們進(jìn)一步研究了Gpr54在以上脂質(zhì)代謝過程中的作用方式及分子機(jī)制。在細(xì)胞水平上,我們通過原代間充質(zhì)干細(xì)胞和3T3-L1細(xì)胞系脂肪細(xì)胞分化模型驗(yàn)證了Gpr54的激活可以促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化；在基因水平上,我們發(fā)現(xiàn)Gpr54的激活可使參與脂質(zhì)合成的PPARγ、ACC1、ADIPO和FAS等基因的表達(dá)發(fā)生顯著的變化,其中以參與脂肪分化過程中的PPARy尤為明顯；在蛋白水平上我們初步發(fā)現(xiàn)MAPK通路的ERK和p-38在Gpr54缺失時(shí)磷酸化水平顯著下調(diào),推測(cè)Gpr54可以通過激活MAPK信號(hào)通路來促進(jìn)脂肪細(xì)胞的分化與脂質(zhì)合成,進(jìn)而影響肥胖的發(fā)生發(fā)展。綜上所述,Gpr54對(duì)脂肪的積累以及脂肪細(xì)胞的分化有直接的促進(jìn)作用,在肥胖的發(fā)生發(fā)展中存在直接調(diào)控能量代謝的途徑。我們的探索為Gpr54在代謝方面生理功能的進(jìn)一步研究提供依據(jù),也為肥胖藥物的靶點(diǎn)探究提供了新的思路。
【關(guān)鍵詞】：Gpr54 肥胖 脂肪細(xì)胞分化 MAPK信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R589.2
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-13
• 第一章 引言13-30
• 1.1 肥胖的現(xiàn)狀與危害13-14
• 1.1.1 概述13-14
• 1.1.2 肥胖的現(xiàn)狀14
• 1.1.3 肥胖的危害14
• 1.2 肥胖的發(fā)生發(fā)展14-21
• 1.2.1 脂肪組織與脂質(zhì)代謝14-17
• 1.2.2 肝臟組織與脂質(zhì)代謝17-18
• 1.2.3 肥胖與免疫18-21
• 1.3 脂質(zhì)代謝相關(guān)GPCR的研究進(jìn)展21-25
• 1.3.1 常見與能量代謝相關(guān)的GPCR22-24
• 1.3.2 潛在的能量代謝GPCR靶點(diǎn)24-25
• 1.4 Gpr54/Kiss1系統(tǒng)的研究進(jìn)展25-29
• 1.4.1 Gpr54/Kiss1系統(tǒng)簡(jiǎn)介25-26
• 1.4.2 Gpr54/Kiss1系統(tǒng)與糖脂代謝26-27
• 1.4.3 Gpr54/Kiss1系統(tǒng)與MAPK信號(hào)通路27-29
• 1.5 本課題研究的目的和意義29-30
• 第二章 材料與方法30-52
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料30-34
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁殖及飼養(yǎng)30
• 2.1.2 細(xì)胞與引物序列30-32
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑32-33
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器33-34
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)耗材34
• 2.2 相關(guān)試劑配制34-36
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法36-52
• 2.3.1 小鼠去勢(shì)手術(shù)36-37
• 2.3.2 口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)37
• 2.3.3 Gpr54基因型鑒定37-38
• 2.3.4 小鼠高脂飼料誘導(dǎo)肥胖38
• 2.3.5 脂肪組織切片38-40
• 2.3.6 Gpr54基因的表達(dá)檢測(cè)40-44
• 2.3.7 SVF中巨噬細(xì)胞的流式分析44-45
• 2.3.8 3T3-L1脂肪細(xì)胞分化模型的建立及Kp-10刺激45-46
• 2.3.9 NAFLD細(xì)胞模型的建立及Kp-10刺激46-47
• 2.3.10 間充質(zhì)干細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞的方法47-48
• 2.3.11 細(xì)胞油紅O染色48
• 2.3.12 血漿中甘油三酯含量的測(cè)定48
• 2.3.13 肝臟中甘油三酯含量的測(cè)定48-49
• 2.3.14 細(xì)胞中甘油含量的測(cè)定49
• 2.3.15 Western Blot(蛋白免疫印跡分析)49-51
• 2.3.16 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析51-52
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析52-67
• 3.1 Gpr54對(duì)肥胖小鼠個(gè)體的影響52-55
• 3.1.1 Gpr54對(duì)小鼠肥胖程度的影響52-54
• 3.1.2 Gpr54對(duì)小鼠血糖調(diào)節(jié)的影響54
• 3.1.3 小結(jié)54-55
• 3.2 Gpr54對(duì)肥胖小鼠脂質(zhì)代謝相關(guān)組織的影響55-60
• 3.2.1 Gpr54在肥胖小鼠中的組織表達(dá)情況55
• 3.2.2 Gpr54對(duì)肥胖小鼠脂肪組織的影響55-58
• 3.2.3 Gpr54對(duì)肥胖小鼠肝臟組織的影響58-59
• 3.2.4 小結(jié)59-60
• 3.3 Gpr54影響脂質(zhì)代謝的作用方式及分子機(jī)制60-67
• 3.3.1 Gpr54促進(jìn)脂肪細(xì)胞的分化60-62
• 3.3.2 Gpr54促進(jìn)脂肪分化相關(guān)基因的表達(dá)62-64
• 3.3.3 Gpr54通過MAPK信號(hào)通路調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝64-65
• 3.3.4 小結(jié)65-67
• 第四章 總結(jié)與討論67-71
• 4.1 全文總結(jié)67
• 4.2 全文討論67-71
• 4.2.1 Gpr54/Kiss1系統(tǒng)在代謝上的相關(guān)研究及與本工作的關(guān)系67-68
• 4.2.2 不同濃度Kp-10對(duì)脂肪分化與肝臟脂質(zhì)代謝的影響68-69
• 4.2.3 Gpr54/Kiss1信號(hào)通路與脂質(zhì)代謝69
• 4.2.4 工作展望69-71
• 參考文獻(xiàn)71-79
• 附錄1 縮略詞表79-81
• 附錄2 碩士期間學(xué)術(shù)成果及科研項(xiàng)目81-82
• 致謝82-83

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