目的:探討糖基化脂肪來源干細胞對SD大鼠單穿支皮瓣神經再生的作用及可能機制,為促進臨床皮瓣感覺恢復提供前期研究基礎。方法:1.經患者知情同意并通過遵義醫(yī)科大學倫理委員會批準后,從遵義醫(yī)科大學燒傷整形外科正常人抽脂手術中獲取皮下脂肪組織,利用Ⅰ型膠原酶消化機械離心分離,從正常人皮下脂肪中提取脂肪來源干細胞（ASCs）,用含10%胎牛血清（FBS）+1%雙抗的低糖DMEM（1g/L）培養(yǎng)基,在37℃、5%CO2恒溫孵箱中進行培養(yǎng),利用0.25%胰酶消化傳代。2.取P3 nASCs進行鑒定,流式細胞儀檢測細胞表面標志物CD105、CD90、CD73、CD45、CD44、CD34、CD11b、CD19及HLA-DR的表達情況。行成脂、成骨、成軟骨誘導分化實驗,分別用油紅“O”、茜素紅、阿利辛藍染色鑒定成脂、成骨、成軟骨誘導分化效果。3.取P3 nASCs,用含0.2%晚期糖基化終產物（AGES）、15%FBS+1%雙抗的高糖DMEM（4.5g/L）的糖基化誘導培養(yǎng)基,在37℃、5%CO2恒溫孵箱中進行培養(yǎng),2-3天換液一次,連續(xù)誘導21天獲得糖基化脂肪來源干細胞（gASCs）。4.分別收集nA... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學貴州省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

大鼠腹部設計3cmx2cm島狀；B：皮瓣切取后剔除單穿支血管周圍多余神經結締

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文鄭詠艦202結果2.1nASCs和gASCs的培養(yǎng)成功從正常人脂肪組織中分離nASCs，原代細胞生長速度較慢，在提取12h后可見少量細胞貼壁生長，呈多邊形或長梭形，48h更換完全培養(yǎng)基后細胞生長速度加快，8-10d融合可達80%，傳代后細胞生長速度明顯增快，5-7天后可再次傳代，傳至P3代后，取nASCs開始糖基化誘導培養(yǎng)，隨著誘導時間延長，gASCs較nASCs增殖速度減慢，需7-9天才能進一步傳代，而nASCs仍保持5-7天可再次傳代，形態(tài)上gASCs形態(tài)與nASCs差異不明顯，排列兩者均呈放射樣漩渦狀生長。（如圖2）nASCsgASCs圖2P3代nASCs與gASCs細胞形態(tài)均呈長梭形，放射狀漩渦狀生長（x40）2.2nASCs的表型鑒定取培養(yǎng)傳代至P3代的nASCs，利用流式細胞儀檢測細胞表面標志物，結果表明：CD44(98.5%)、CD73(99.96%)、CD90(97.09%)、CD105(98.00%)表達呈陽性，CD45/CD34/CD11b/CD19/HLA-DR(1.56%)表達呈陰性。（如圖3）

CD44(98.5%)、CD73(99.96%)、CD90(97.09%)、CD105(98.00%)，呈陽性表達，


本文編號：3411037