目的:驗(yàn)證TRPM4（transient receptor potential melastatin-4）在口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞的表達(dá),探討其對(duì)人口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞遷移與增殖中的作用。方法:收集人正常頰黏膜組織進(jìn)行原代細(xì)胞提取與原代培養(yǎng);采用RT-PCR和細(xì)胞免疫熒光方法檢測(cè)成纖維細(xì)胞中TRPM4的表達(dá)。全細(xì)胞膜片鉗記錄成纖維細(xì)胞TRPM4通道的全細(xì)胞電流。MTT法和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)應(yīng)用TRPM4通道特異性阻斷劑（9-菲酚）或特異性siRNA抑制TRPM4通道的功能對(duì)成纖維細(xì)胞增殖和遷移的影響。結(jié)果:人口腔頰黏膜成纖維細(xì)胞功能性表達(dá)TRPM4。抑制TRPM4通道的功能能夠明顯降低成纖維細(xì)胞的增殖和遷移能力。結(jié)論:TRPM4通道參與成纖維細(xì)胞增殖以及遷移能力的調(diào)控。 

【文章來(lái)源】：口腔醫(yī)學(xué)研究. 2020,36(05)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

頰黏膜成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)(×40)

TRPM4特異FAM-siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞24 h后,倒置熒光顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞發(fā)出綠色熒光(圖5a)。RT-PCR結(jié)果顯示成纖維細(xì)胞中TRPM4無(wú)表達(dá)(圖5b)。膜片鉗實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在細(xì)胞內(nèi)液1 μmol/L鈣離子濃度條件下,與對(duì)照組相比較,TRPM4的全細(xì)胞電流明顯減弱(圖5c)。MTT結(jié)果顯示:加入100 μmol/L 9-菲酚或者將TRPM4進(jìn)行基因沉默24 h后,能夠抑制成纖維細(xì)胞的增殖能力,9-菲酚組的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率為13.76%,siRNA轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞增殖率為16.03%(P<0.05)。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)表明,9-菲酚處理組以及TRPM4 基因沉默組細(xì)胞在第24小時(shí)的細(xì)胞遷移速度明顯低于對(duì)照組細(xì)胞(圖6)。圖3 免疫熒光,RT-PCR 鑒定TRPM4在頰黏膜成纖維細(xì)胞的表達(dá)(×200)

免疫熒光,RT-PCR 鑒定TRPM4在頰黏膜成纖維細(xì)胞的表達(dá)(×200)


本文編號(hào)：3409359