目的:驗證TRPM4（transient receptor potential melastatin-4）在口腔頰黏膜成纖維細胞的表達,探討其對人口腔頰黏膜成纖維細胞遷移與增殖中的作用。方法:收集人正常頰黏膜組織進行原代細胞提取與原代培養(yǎng);采用RT-PCR和細胞免疫熒光方法檢測成纖維細胞中TRPM4的表達。全細胞膜片鉗記錄成纖維細胞TRPM4通道的全細胞電流。MTT法和細胞劃痕實驗分別檢測應用TRPM4通道特異性阻斷劑（9-菲酚）或特異性siRNA抑制TRPM4通道的功能對成纖維細胞增殖和遷移的影響。結果:人口腔頰黏膜成纖維細胞功能性表達TRPM4。抑制TRPM4通道的功能能夠明顯降低成纖維細胞的增殖和遷移能力。結論:TRPM4通道參與成纖維細胞增殖以及遷移能力的調控。 

【文章來源】：口腔醫(yī)學研究. 2020,36(05)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

頰黏膜成纖維細胞的原代培養(yǎng)(×40)

TRPM4特異FAM-siRNA轉染細胞24 h后,倒置熒光顯微鏡下可見細胞發(fā)出綠色熒光(圖5a)。RT-PCR結果顯示成纖維細胞中TRPM4無表達(圖5b)。膜片鉗實驗結果表明,在細胞內液1 μmol/L鈣離子濃度條件下,與對照組相比較,TRPM4的全細胞電流明顯減弱(圖5c)。MTT結果顯示:加入100 μmol/L 9-菲酚或者將TRPM4進行基因沉默24 h后,能夠抑制成纖維細胞的增殖能力,9-菲酚組的細胞生長抑制率為13.76%,siRNA轉染組的細胞增殖率為16.03%(P<0.05)。細胞劃痕實驗表明,9-菲酚處理組以及TRPM4 基因沉默組細胞在第24小時的細胞遷移速度明顯低于對照組細胞(圖6)。圖3 免疫熒光,RT-PCR 鑒定TRPM4在頰黏膜成纖維細胞的表達(×200)

免疫熒光,RT-PCR 鑒定TRPM4在頰黏膜成纖維細胞的表達(×200)


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