背景:結(jié)直腸癌是全球最常見的癌癥之一,它的發(fā)生和進(jìn)展可因累積抑癌基因和癌基因的突變而形成。DNA損傷修復(fù)系統(tǒng)缺陷導(dǎo)致基因突變率增高,促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展。作為一種重要的DNA修復(fù)酶,Nei核酸內(nèi)切酶Ⅷ樣蛋白1（Nei endounucleaseⅧ-like1,NEIL1）與多種癌癥的發(fā)生有關(guān),但是其對結(jié)直腸癌進(jìn)展的確切作用尚不清楚。通過大數(shù)據(jù)分析我們發(fā)現(xiàn)高表達(dá)NEIL1的結(jié)直腸癌患者存活較差。在人結(jié)腸癌細(xì)胞中通過siRNA沉默和重組質(zhì)粒過表達(dá)實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)NEIL1可以抑制結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡和促進(jìn)細(xì)胞活力。通過大數(shù)據(jù)及靶向軟件分析我們發(fā)現(xiàn)NEIL1可能受到miR-7-5p的潛在靶向調(diào)控,并對其進(jìn)行了驗(yàn)證。并探討了miR-7-5p的調(diào)控對NEIL1抑制細(xì)胞凋亡和促進(jìn)細(xì)胞活力作用的影響。我們的數(shù)據(jù)表明NEIL1通過抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞的凋亡而促進(jìn)細(xì)胞活力,此作用受miR-7-5p負(fù)向調(diào)控調(diào)節(jié)。本研究為NEIL1調(diào)控結(jié)腸癌發(fā)展的網(wǎng)絡(luò)提供了新穎的見解,并為其作為結(jié)直腸癌的潛在治療靶點(diǎn)提供依據(jù)。目的:本研究旨在探討內(nèi)切核酸酶VIII-like1（NEIL1）在結(jié)直腸癌（CRC）發(fā)病機(jī)理中的作用。方法:[... 

【文章來源】：延安大學(xué)陜西省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

TCGA數(shù)據(jù)庫查詢NEIL1在癌癥病人中的生存期預(yù)測

-15-NEIL1抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡的作用及其受調(diào)機(jī)制從TCGA數(shù)據(jù)庫中提取結(jié)直腸癌組織中NEIL1表達(dá)的數(shù)據(jù)，使用長秩分析發(fā)現(xiàn)NEIL1高表達(dá)的CRC患者存活較差。圖3-1TCGA數(shù)據(jù)庫查詢NEIL1在癌癥病人中的生存期預(yù)測Figure3-1TheTCGAdatabasequeriesNEIL1forsurvivalpredictionsincancerpatients3.2.2使用TCGA數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)分析NEIL1與miR-7-5p相關(guān)性從癌癥基因組圖譜（TCGA）數(shù)據(jù)庫（https://xenabrowser.net）中提取結(jié)直腸癌組織中NEIL1表達(dá)的數(shù)據(jù)，使用長秩（Matel-Cox）分析發(fā)現(xiàn)NEIL1高表達(dá)的CRC患者存活較差。對于miRNA目標(biāo)預(yù)測，我們通過兩個(gè)常用公共數(shù)據(jù)庫TargetScan（http://www.targetscan.org/vert_71）和miRDB（http://mirdb.org/miRDB），并使用在線交叉檢查工具（http：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html）找到miR-7-5p可以靶向NEIL1的3"-UTR。最后用皮爾遜相關(guān)系數(shù)(Pearsoncorrelationcoefficient）分析出在結(jié)腸癌組織中，miR-7-5p和NEIL1的表達(dá)量呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。圖3-2TCGA數(shù)據(jù)庫中NEIL1與miR-7-5p顯著負(fù)相關(guān)Figure3-2NEIL1andmiR-7-5paresignificantlynegativelycorrelatedintheTCGAdatabase

-27-NEIL1抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡的作用及其受調(diào)機(jī)制圖4-1通過qRT-PCR驗(yàn)證NEIL1mRNA的變化,通過蛋白質(zhì)印跡分析NEIL1蛋白的變化Figure4-1NEIL1mRNAchangesverifiedbyqRT-PCR,andNEIL1proteinchangesanalyzedbyWesternblotNEIL1對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖能力的影響接著，我們將NEIL1干擾片段及對照分別轉(zhuǎn)染至HCT116和SW480細(xì)胞中，運(yùn)用MTT實(shí)驗(yàn)檢測兩種細(xì)胞系增殖的改變。如圖所示，MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，較Ctrl.組，NEIL1組HCT116細(xì)胞的細(xì)胞活力在72h處明顯下調(diào)。以上結(jié)果說明，敲低NEIL1能夠抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖能力。圖4-2MTT分析siNEIL1處理的HCT116/SW480細(xì)胞的細(xì)胞活力Figure4-2MTTanalysisofcellviabilityofsiNEIL1-treatedHCT116/SW480cells


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