目的:探討磷酸二酯酶9（PDE9）-環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）-cGMP依賴性蛋白激酶（PKG）信號(hào)通路在腦缺血后海馬神經(jīng)發(fā)生中的作用,并觀察天麻素（GAS）的作用及其可能機(jī)制。方法:用7⁸周齡雄性C57BL/6小鼠,采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈夾閉（BCCAO）方法建立小鼠腦缺血模型,而后給予不同劑量GAS（50 mg/kg/d和100mg/kg/d,i.p.）治療14 d。于造模后d 8用H.E.染色觀察海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元病理形態(tài);d 15利用BrdU和DCX免疫熒光染色觀察海馬齒狀回神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）的增殖和遷移,d 29 BrdU/NeuN雙標(biāo)免疫熒光染色檢測(cè)海馬齒狀回NSCs分化整合,用ELISA分析PDE9活性和cGMP水平,并用Western blot檢測(cè)PKG和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的蛋白表達(dá);d 29開始至d 34結(jié)束,利用Morris水迷宮檢測(cè)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力。為進(jìn)一步確定信號(hào)通路的作用,采用懸浮培養(yǎng)法分離純化新生1日齡SD大鼠的海馬NSCs,利用氧糖剝奪/再灌注（OGD/R）法模擬建立腦缺血模型,觀察GAS（0.01μmol/L,0.1μmo... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文28AB圖1-2小鼠腦缺血后空間學(xué)習(xí)記憶的變化(x±s,n=6)Fig.1-2Changesoflearningandmemoryaftercerebralischemiainmice.A：Learningabilitytestingbytheescapelatencytoplatform.B：Memoryabilitytestingbythefrequencyofcrossingplatform.Dataarepresentedasthemean±S.D.ofsixindependentexperiments.*P<0.05,**P<0.01vsSham.2.2腦缺血后小鼠海馬病理變化Sham組小鼠海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元結(jié)構(gòu)清晰，排列緊密，核圓形，染色清晰，胞核呈深藍(lán)色；而Model組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)不規(guī)則，出現(xiàn)明顯核固縮，排列松散，神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目顯著減少（P<0.01）（圖1-3）。2.3腦缺血后小鼠海馬神經(jīng)發(fā)生的變化腦缺血15d后，Model組小鼠海馬齒狀回顆粒下層BrdU和DCX陽性細(xì)胞與Sham組對(duì)比，其數(shù)量均有顯著增加（P<0.01）（圖1-4A、B、C和D）；腦缺血29d后，Model組小鼠海馬齒狀回顆粒下層BrdU/NeuN陽性細(xì)胞與Sham組對(duì)比，其數(shù)量也顯著增加（P<0.01）（圖1-4E、F）。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文29ABShamModel圖1-3小鼠腦缺血后海馬CA1區(qū)病理變化(x±s,n=4)Fig.1-3ChangesofpathologicalinjuryinhippocampusCA1regionaftercerebralischemiainmice.A：RepresentativemicrophotographsofHEstainedhippocampusslices(scalebar=20μm).B：QuantitativeanalysisofthenumbersofCA1neuronsinhippocampal.Dataarepresentedasthemean±S.D.offourindependentexperiments.**P<0.01vsSham.

【參考文獻(xiàn)】：
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