目的:研究人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Human umbilical cord mesenchymal stem cell,HucMSC）對(duì)馬兜鈴酸（aristolochic acid,AA）誘導(dǎo)小鼠腎纖維化的干預(yù)作用,并初步探討其中的作用機(jī)制。方法:體內(nèi)實(shí)驗(yàn):將成年C57BL/6雄性小鼠隨機(jī)分為5組,分別為:正常對(duì)照組（腹腔注射PBS）、MSC對(duì)照組（腹腔注射PBS,尾靜脈注射MSC）、AA暴露組（腹腔注射AA）、MSC+AA組（尾靜脈注射MSC后,腹腔注射AA）及AA+MSC組（腹腔注射AA完成后,尾靜脈注射MSC）。AA劑量為5mg/kg,隔天注射,共注射7次,MSC注射數(shù)目為1×10⁶。注射完成后第4周麻醉并處死,收集血清及腎臟標(biāo)本。檢測(cè)腎功能及腎臟組織形態(tài)學(xué)改變,Western Blot和免疫組化法檢測(cè)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化指標(biāo)及TGF-β/Smad信號(hào)通路指標(biāo)的表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn):人腎小管上皮細(xì)胞HK-2隨機(jī)分為4組,分別為正常對(duì)照組、MSC對(duì)照組、TGF組及TGF+MSC組,TGF-β1細(xì)胞因子劑量為5ng/ml,HK-2細(xì)胞和MSC細(xì)胞采用transwell小室共培養(yǎng),... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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各組小鼠血肌酐及尿素氮統(tǒng)計(jì)圖（A）血肌酐（B）尿素氮

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文21MSC+AA組和AA+MSC組炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度明顯減輕,腎小管損害較為改善,較Control組仍可見(jiàn)部分炎癥浸潤(rùn)及腎小管擴(kuò)張。Masson染色顯示,Control組和MSC組腎臟形態(tài)結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯異常,無(wú)明顯膠原纖維沉積;AA組可見(jiàn)腎臟形態(tài)結(jié)構(gòu)破壞,間質(zhì)區(qū)域可見(jiàn)大量膠原纖維沉積;與AA組相比,加入MSC干預(yù)的兩組可見(jiàn)間質(zhì)區(qū)域膠原纖維沉積明顯減少(圖1.2),但較Control組仍有部分膠原纖維沉積。圖1.2各組小鼠腎臟形態(tài)學(xué)染色結(jié)果從上至下分別為HE染色、PAS染色和Masson染色（標(biāo)尺：50μm）Figure.1.2Histomorphologyofthekidneyineachgroup.Toprow:HEstainingofkidney,middlerow:PASstainingofkidney,bottomrow:Masson"strichromestainingofkidney(Scalebar:50μm)2.3MSC在腎臟內(nèi)定位通過(guò)人細(xì)胞核特異性抗體MAB1281免疫組化染色，可以對(duì)通過(guò)尾靜脈注射MSC到達(dá)腎臟情況進(jìn)行檢測(cè)（圖1.3）。研究發(fā)現(xiàn)，Control組中無(wú)陽(yáng)性表達(dá)，MSC組、MSC+AA組及AA+MSC組中可見(jiàn)MSC存在，其中MSC組MAB1281表達(dá)較少，而MSC+AA組和AA+MSC組中MAB1281表達(dá)量較MSC組明顯增多。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文22圖1.3MAB1281免疫組化結(jié)果，MSC在腎臟內(nèi)定位。上圖：(標(biāo)尺:100μm)下圖：(標(biāo)尺:50μm)Figure.1.3ExpressionofMAB1281,andthelocationofHucMSCsinkidneytissuedetectedbyImmunohistochemicalstaining.Thesmallbluesquaresinupperimages(scalebar:100μm)aremagnifiedtotheimagesbelow(scalebar:50μm)ineachgroup3討論近年來(lái)有文獻(xiàn)報(bào)道，部分中草藥其中的成分馬兜鈴酸（AA）的攝入可能引發(fā)馬兜鈴酸腎病，患者表現(xiàn)為進(jìn)行性的間質(zhì)性腎炎，出現(xiàn)腎功能持續(xù)惡化伴有腎臟瘢痕形成，最終可能會(huì)進(jìn)展成為終末期腎病[1]。于是有學(xué)者利用AA成功構(gòu)建小鼠腎纖維化模型，并發(fā)現(xiàn)該動(dòng)物模型小鼠腎臟病理特征與慢性腎病患者類似，表現(xiàn)為腎小管-間質(zhì)的廣泛纖維化伴萎縮[2-4]。相較于傳統(tǒng)單側(cè)輸尿管梗阻（UUO）的慢性腎病造模方式，這種方法造模方式難度較小，可以作為間質(zhì)纖維化的一般模型。此外，還可以有效排除UUO模型中的另一側(cè)腎臟代償，對(duì)腎功能進(jìn)行更準(zhǔn)確的測(cè)量，貼近于臨床病例研究。因此，在本實(shí)驗(yàn)中，我們選用AA來(lái)構(gòu)建小鼠慢性腎病腎纖維化模型，并分別在AA注射前后用HucMSC進(jìn)行干預(yù)，來(lái)驗(yàn)證其預(yù)防和治療作用。本部分研究中，AA暴露引起小鼠血肌酐和尿素氮水平的升高，提示小鼠的腎功能受損；HE和PAS染色結(jié)果提示小鼠腎臟結(jié)構(gòu)破壞，炎癥細(xì)胞聚集，呈現(xiàn)病理變化；Masson染色中，可以發(fā)現(xiàn)大量膠原纖維沉積在腎臟間質(zhì)區(qū)域，引起腎臟纖維化改變。為分別觀察HucMSC對(duì)AA誘導(dǎo)纖維化的預(yù)防和治療作用，在AA暴


本文編號(hào)：3399865