目的:結(jié)直腸癌是最常見惡性腫瘤之一,在我國(guó)居癌癥發(fā)病率和死亡率的第五位。結(jié)直腸癌發(fā)生過程中會(huì)出現(xiàn)原癌基因的激活、抑癌基因的失活、錯(cuò)配修復(fù)基因改變、凋亡調(diào)節(jié)紊亂等一系列生物學(xué)變化。目前,仍沒有能夠監(jiān)控或體現(xiàn)這些生物學(xué)變化的高效分子標(biāo)記物。因此,研究結(jié)直腸癌相關(guān)基因及其功能,不僅有利于闡明結(jié)直腸癌發(fā)生的分子機(jī)制,還可能為臨床診治、藥物篩選及預(yù)后判斷提供新的分子標(biāo)記物。SETDB1（SET domain bifurcated 1,SET結(jié)構(gòu)域分支型1）蛋白是一種組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶,在多種人類實(shí)體瘤中呈現(xiàn)高表達(dá),其高表達(dá)與腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。近年來的研究表明,SETDB1很可能是一種促癌基因,但SETDB1在結(jié)直腸癌中的功能及分子機(jī)制仍不清楚。本課題擬在臨床標(biāo)本、體外實(shí)驗(yàn)、體內(nèi)動(dòng)物模型中研究SETDB1在結(jié)直腸癌發(fā)生中的功能,并通過體外實(shí)驗(yàn)研究SETDB1在結(jié)直腸癌中調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路的分子機(jī)制,進(jìn)而為結(jié)直腸腫瘤的發(fā)生提供新的理論依據(jù)。方法:1、采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)SETDB1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)情況,并分析SETDB1在癌組織中的表達(dá)與各臨床病理參數(shù)的關(guān)系。2、... 

【文章來源】：西南醫(yī)科大學(xué)四川省

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

SETDB1在結(jié)直腸癌組織和癌旁組織中的表達(dá)情況（200×）（A）癌旁組織；（B）癌組織

西南醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文-39-3驗(yàn)證SETDB1過表達(dá)/干擾效率通過RT-qPCR和WesternBlot檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染SETDB1過表達(dá)/干擾質(zhì)粒后的HCT116、SW480細(xì)胞株中SETDB1mRNA和蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果提示：HCT116-SETDB1及SW480-SETDB1細(xì)胞中的SETDB1mRNA和蛋白水平較對(duì)照組明顯升高（見圖3.1），說明建立過表達(dá)SETDB1細(xì)胞株成功，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。在敲低SETDB1的細(xì)胞株中，HCT116-ShRNA1及SW480-ShRNA1細(xì)胞中的SETDB1mRNA和蛋白水平較對(duì)照組明顯下降（見圖3.2），干擾SETDB1成功，因此本課題選用HCT116-ShRNA1及SW480-ShRNA1細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。圖3.1穩(wěn)定過表達(dá)SETDB1的HCT116/SW480細(xì)胞株的轉(zhuǎn)染效率（***，P<0.001）(A)&(B)：RT-qPCR；(C)&(D)：WesternBlotFigure3.1ThetransfectionefficiencyofHCT116/SW480celllineswithstableoverexpression(***，P<0.001)(A)&(B)：RT-qPCR；(C)&(D)：WesternBlot

西南醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文-40-4過表達(dá)/敲低SETDB1對(duì)HCT116/SW480細(xì)胞株生物學(xué)功能的影響4.1過表達(dá)/敲低SETDB1對(duì)HCT116/SW480細(xì)胞體外增殖能力的影響首先通過CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)穩(wěn)定過表達(dá)/敲低SETDB1后的HCT116、SW480細(xì)胞株增殖能力的變化，連續(xù)檢測(cè)5天存活細(xì)胞的吸光（OD）值。結(jié)果顯示，從第二天起，HCT116-SETDB1、SW480-SETDB1細(xì)胞增殖速度較對(duì)照組明顯增快，HCT116-ShRNA1、SW480-ShRNA1細(xì)胞增殖能力較對(duì)照組明顯下降（見圖4.1.1）。圖3.2穩(wěn)定敲低SETDB1的HCT116/SW480細(xì)胞株的轉(zhuǎn)染效率（*，P<0.05；***，P<0.001）(A)&(B)：RT-QPCR；(C)&(D)：WesternBlotFigure3.2ThetransfectionefficiencyofHCT116/SW480celllineswithstableknockdown(*，P<0.05；***，P<0.001)(A)&(B)：RT-QPCR；(C)&(D)：WesternBlot

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]SETDB1在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義[J]. 李金梅,陳紅,杜強(qiáng),王旭,馬秋雙,李小莉,張金庫(kù).  臨床與病理雜志. 2019(04)
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[3]Histone methyltransferases and demethylases:regulators in balancing osteogenic and adipogenic differentiation of mesenchymal stem cells[J]. Peng Deng,Qian-Ming Chen,Christine Hong,Cun-Yu Wang.  International Journal of Oral Science. 2015(04)
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本文編號(hào)：3391138