目的研究microRNA-200b（miR-200b）在大鼠角膜新生血管（corneal neovascularization,CNV）形成過程中的作用,初步探討相關(guān)機(jī)制。方法1.選取40只雌性SD大鼠,采用縫線法構(gòu)建單眼CNV動(dòng)物模型（實(shí)驗(yàn)組）,另一眼不做處理（正常組）,造模后第4、7、14、21天于裂隙燈下觀察角膜新生血管生長情況,RT-PCR（Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction）檢測造模后不同時(shí)間點(diǎn)各組大鼠角膜組織中miR-200b以及VEGF mRNA的表達(dá)。HE染色（Hematoxylin-eosin staining）觀察角膜組織的結(jié)構(gòu)及炎癥細(xì)胞的浸潤。2.將miR-200b模擬物（miR-200b mimic）、miR-200b抑制物（miR-200b inhibitor）及其各自的陰性對照（Scramble）利用脂質(zhì)體技術(shù)轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）,RT-PCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率。3.分別運(yùn)用CCK-8、劃痕實(shí)驗(yàn)、transwe... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：40 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

縫線法構(gòu)建大鼠CNV模型

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文172.2RT-PCR檢測MiR-200b及VEGF的表達(dá)取正常和縫線后第4、7、14、21天角膜組織行RT-PCR檢測miR-200b/VEGF的表達(dá)，結(jié)果顯示縫線后第4、7、14、21天角膜組織中miR-200b表達(dá)降低，而VEGF表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，）（圖2）。圖2RT-PCR檢測縫線后各時(shí)間點(diǎn)miR-200b及VEGFmRNA的表達(dá)Figure2TheexpressionofmiR-200bandVEGFmRNAwasdetectedbyRT-PCRatvarioustimepointsaftersuture*P<0.05，**P<0.01，***P<0.0012.3HE染色檢測角膜組織形態(tài)學(xué)及炎性細(xì)胞浸潤情況HE染色結(jié)果顯示，正常對照組（0天）角膜組織排列整齊，無炎性細(xì)胞浸潤，造模后第4、7、14、21天可見角膜組織排列紊亂，不規(guī)則。炎癥細(xì)胞浸潤個(gè)數(shù)在造模后第4天(123.0±14.491)、7天(170.75±29.056)、14天(223.5±26.147)、21天（76.67±11.72），與正常組相比差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，圖3）。圖3HE染色檢測角膜組織形態(tài)學(xué)及炎性細(xì)胞浸潤情況Figure3HEstainingdetectcornealmorphologyandinflammatorycellinfiltration

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文172.2RT-PCR檢測MiR-200b及VEGF的表達(dá)取正常和縫線后第4、7、14、21天角膜組織行RT-PCR檢測miR-200b/VEGF的表達(dá)，結(jié)果顯示縫線后第4、7、14、21天角膜組織中miR-200b表達(dá)降低，而VEGF表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，）（圖2）。圖2RT-PCR檢測縫線后各時(shí)間點(diǎn)miR-200b及VEGFmRNA的表達(dá)Figure2TheexpressionofmiR-200bandVEGFmRNAwasdetectedbyRT-PCRatvarioustimepointsaftersuture*P<0.05，**P<0.01，***P<0.0012.3HE染色檢測角膜組織形態(tài)學(xué)及炎性細(xì)胞浸潤情況HE染色結(jié)果顯示，正常對照組（0天）角膜組織排列整齊，無炎性細(xì)胞浸潤，造模后第4、7、14、21天可見角膜組織排列紊亂，不規(guī)則。炎癥細(xì)胞浸潤個(gè)數(shù)在造模后第4天(123.0±14.491)、7天(170.75±29.056)、14天(223.5±26.147)、21天（76.67±11.72），與正常組相比差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，圖3）。圖3HE染色檢測角膜組織形態(tài)學(xué)及炎性細(xì)胞浸潤情況Figure3HEstainingdetectcornealmorphologyandinflammatorycellinfiltration

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]角膜新生血管藥物治療新進(jìn)展[J]. 劉小天,龔雁.  臨床合理用藥雜志. 2020(07)
[2]生物信息學(xué)預(yù)測類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎核心基因與互作miRNA[J]. 丁曉,郝穎,王維山,孟德峰,王夢雨,王超.  安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020(02)
[3]基于miR-200b探討冠心通絡(luò)方對糖尿病大鼠血管重構(gòu)的影響[J]. 牟雷,梁麗嫦,范雅雯,謝天,唐新征,江曉兵,張?zhí)旆?  中藥材. 2020(01)
[4]與腫瘤血管生成相關(guān)microRNA的研究進(jìn)展[J]. 卜曉敏,李立文,夏亮,徐笑紅.  山東醫(yī)藥. 2020(01)
[5]miR-200b-5p靶向ATAD2調(diào)控P13K/AKT信號通路參與宮頸癌血管生成的作用機(jī)制[J]. 朱曉志,王冬梅,王麗蓉.  中國性科學(xué). 2019(07)
[6]復(fù)方丹參滴丸通過miR-200b調(diào)控VEGF/TGF-β1影響糖尿病心肌病大鼠心臟的作用機(jī)制[J]. 范雅雯,梁麗嫦,張?zhí)旆?牟雷,謝天,江曉兵,任輝.  中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志. 2019(17)
[7]中藥單體對眼部新生血管性疾病治療作用的研究現(xiàn)狀[J]. 褚文麗,陳水齡,亢澤峰,李維義,劉健.  國際眼科雜志. 2019(02)
[8]新生未成熟大鼠缺氧缺血性腦損傷時(shí)微小RNA-200b對缺氧誘導(dǎo)因子1α的調(diào)控作用[J]. 高笑妮,楊麗君,張囡,崔紅.  中華新生兒科雜志. 2019 (01)
[9]microRNA-200b下調(diào)DNMT3A的表達(dá)對SD大鼠心肌纖維化抑制作用的機(jī)制研究[J]. 秦潤禾,陶輝,倪世豪,代晨,丁季飛,施鵬,石開虎.  中國藥理學(xué)通報(bào). 2018(10)
[10]miR-142通過上調(diào)AKT2的表達(dá)促進(jìn)角膜新生血管形成[J]. 沈厲,周善璧,毛旖旎,林天蘭,岑超,胡雁,侯勝平.  重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2018(07)

博士論文
[1]miRNA-mRNA差異表達(dá)與卵巢癌多藥耐藥關(guān)系的研究[D]. 劉玲.廣西醫(yī)科大學(xué) 2014



本文編號：3381171