目的:探究釉成熟蛋白在體外誘導(dǎo)鈣、磷離子礦化及釉質(zhì)原位再生的能力。方法:1.釉成熟蛋白的重組和表達(dá):從處于釉質(zhì)發(fā)育期的第三磨牙牙胚中提取牙胚細(xì)胞的總RNA,通過反轉(zhuǎn)錄、擴增的方式得到人cDNA片段,以cDNA作為模板通過RT-PCR獲得釉成熟蛋白全長基因。將釉成熟蛋白全長基因與載體連接以構(gòu)建pET-28a（+）-AMTN表達(dá)載體。將pET-28a（+）-AMTN表達(dá)載體轉(zhuǎn)入Rosetta（DE3）大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞,培養(yǎng)、收集蛋白表達(dá)產(chǎn)物,蛋白純化后得到目的蛋白,并經(jīng)檢測后確認(rèn)為釉成熟蛋白。2.釉成熟蛋白的自組裝:將釉成熟蛋白與Tris-HCL/人工礦化液配制為釉成熟蛋白溶液（濃度為100?μg/ml,PH=7.6）在室溫下孵育1分鐘、10分鐘后透射電鏡觀察自組裝過程。3.釉成熟蛋白體的外礦化能力:使用新鮮的完整離體第三磨牙制備牙片,酸蝕、超聲清洗、干燥后涂布釉成熟蛋白溶液,室溫孵育后置于剛配置好的人工礦化液中37℃培養(yǎng)7天后取樣進行掃描電鏡、X線衍射分析觀察礦化產(chǎn)物表征。結(jié)果:1.成功制備并鑒定了釉成熟蛋白。2.透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)釉成熟蛋白1分鐘自組裝為納米小球,10分鐘、30分鐘時納... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

羥基磷灰石結(jié)構(gòu)示意圖[1]

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文張鵬6A.立體結(jié)構(gòu)B.平面結(jié)構(gòu)圖1-1羥基磷灰石結(jié)構(gòu)示意圖[1]圖1-2人牙釉質(zhì)的七級分級結(jié)構(gòu)示意圖[2]2釉質(zhì)的理化性質(zhì)牙釉質(zhì)由無機物、有機物、水組成，若按質(zhì)量比，無機物、有機物、水分別占96%~97%、2~4%、＜1%；若按體積計算，無機物、有機物、水分別占86%、2%、12%。釉質(zhì)中的無機物主要為羥基磷灰石，此外，還含有的鎂，氟，鈉，鉀，鐵，錳，鍶，鋅，鉛等微量元素。有機物主要為釉質(zhì)發(fā)育過程中所殘余的釉基質(zhì)蛋白和相關(guān)蛋白酶。釉質(zhì)中所含水大多分布在圍繞羥基磷灰石晶體的含水層；其余的水則與有機物結(jié)合，有助于某些離子通過，使得釉質(zhì)具有滲透性。釉質(zhì)分布于牙冠最外層，在前牙切端的厚度約2mm，在后牙牙尖處釉質(zhì)厚度約為2.5mm，自?方向頸部逐漸變保釉質(zhì)呈半透明乳白色，若礦化程度越高，則透明程度越高。礦化程度高的牙冠呈淡黃色，是因高度礦化的釉質(zhì)透射出了牙本質(zhì)的淡黃色。極高的羥基磷灰石含量及其各向異性巧妙排列所組成的精密結(jié)構(gòu)，使得釉質(zhì)成為人體中最硬的鈣化組織。根據(jù)不同的

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文張鵬14pMD18-T載體、pET-28a(+)載體及大腸桿菌DH5α由生工生物工程（上海）有限公司提供，并保存于本實驗室。圖2-1pMD18-T載體結(jié)構(gòu)示意圖圖2-2pET-28a(+)載體結(jié)構(gòu)示意圖

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Enamel biomimetics—fiction or future of dentistry?[J]. Mirali Pandya,Thomas G.H.Diekwisch.  International Journal of Oral Science. 2019(01)
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[3]通過自生長方式實現(xiàn)殼聚糖—膠原聚合物引導(dǎo)的牙體硬組織仿生再礦化[J]. 任迅,姚靜,杜芹,廖楚航,田鯤.  華西口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2014(05)
[4]自組裝寡肽在體外模擬牙釉柱晶體形成[J]. 王磊,白薇,馮海蘭,賈欣茹.  北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2007(01)
[5]人牙釉質(zhì)分級結(jié)構(gòu)的觀察[J]. 葛俊,崔福齋,吉寧,閻建新.  牙體牙髓牙周病學(xué)雜志. 2006(02)

博士論文
[1]蛋白調(diào)控骨、牙礦化的研究及模擬[D]. 程振江.清華大學(xué) 2010
[2]牙釉質(zhì)表面的功能化及其仿生礦化的應(yīng)用基礎(chǔ)研究[D]. 王志偉.暨南大學(xué) 2008

碩士論文
[1]釉成熟蛋白的表達(dá)和礦化能力的研究[D]. 馮小云.電子科技大學(xué) 2017



本文編號：3371342