人偏肺病毒（human metapneumovirus,hMPV）自2001年荷蘭科學(xué)家首次從呼吸道疾病患者的氣道分泌物中分離發(fā)現(xiàn)至今已有19年,在世界各地均有流行,是嬰幼兒和免疫功能障礙的兒童引起呼吸道疾病的主要病原體。盡管hMPV已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)多年,但目前大部分的研究還是主要集中在流行病學(xué)方面,我們對(duì)于其感染機(jī)制了解還甚少,也沒有合適的疫苗和藥物可以預(yù)防或者控制hMPV感染后在體內(nèi)的復(fù)制。課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)該病毒可以通過胞吞的方式進(jìn)入細(xì)胞且與脂筏密切相關(guān)。但對(duì)于入胞后的相關(guān)機(jī)制并不了解。本次實(shí)驗(yàn)首先對(duì)hMPV感染后引起的細(xì)胞內(nèi)機(jī)制進(jìn)行研究,通過LC3間接免疫熒光染色,GFP-RFP-LC3熒光質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,自噬相關(guān)基因和通路蛋白的檢測(cè)以及驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)hMPV感染后和宿主細(xì)胞的相互作用與自噬相關(guān),且該過程有JNK,MEK/ERK通路的參與,病毒誘導(dǎo)的自噬反過來可以抑制病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制。本課題的另一部分研究還發(fā)現(xiàn)辛伐他汀可以抑制人偏肺病毒的復(fù)制且該過程和AKT/mTOR通路誘導(dǎo)的自噬相關(guān),具有一定的抗炎作用。本研究加深了對(duì)人偏肺病毒與宿主之間相互作用機(jī)制的理解并為病毒的臨床治療提供了理論基礎(chǔ)... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

人偏肺病毒感染16HBE細(xì)胞誘導(dǎo)自噬的發(fā)生

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文212.2人偏肺病毒通過JNK和MEK/ERK的通路誘導(dǎo)自噬細(xì)胞分為空白組和hMPV感染組（MOI=10），WesternBlot（圖1-2）檢測(cè)hMPV感染后是否可以激活相關(guān)通路的表達(dá)。病毒感染后提取細(xì)胞的蛋白質(zhì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)JNK和MEK/ERK通路的磷酸化表達(dá)明顯增加。圖1-2JNK和MEK/ERK通路蛋白表達(dá)Figure1-2TheproteinexpressionofJNKandMEK/ERKpathways2.3驗(yàn)證JNK和MEK/ERK通路的準(zhǔn)確性為了驗(yàn)證以上兩條通路確實(shí)在自噬過程中起作用，我們使用特異性的通路抑制劑來抑制通路再檢測(cè)自噬相關(guān)基因的mRNA和蛋白水平的表達(dá)。25μmol/lSP600125和10μmol/lPD98059作用后相關(guān)通路JNK和MEK/ERK被沉默，顯示低表達(dá)狀態(tài)，自噬標(biāo)記基因LC3的蛋白質(zhì)水平表達(dá)降低（圖1-3A），ATG5,ATG7,Beclin1的mRNA水平表達(dá)減低（圖1-3B），抑制以上兩條通路可以有效抑制自噬。抑制劑處理后感染病毒對(duì)細(xì)胞進(jìn)行間接免疫熒光染色，結(jié)果顯示LC3斑點(diǎn)的ofautophagyrelatedgeneLC3.（D）TheexpressionofautophagyrelatedgeneATG5,ATG7andBeclin1.

hMPV通過JNK和MEK/ERK通路誘導(dǎo)自噬

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鱗翅目昆蟲中自噬相關(guān)分子Atg8的研究進(jìn)展[J]. 王贏,張葉軍,黃慧,李洪艷,崔玉影,鄒偉.  昆蟲學(xué)報(bào). 2015(02)
[2]細(xì)胞自噬與病毒感染[J]. 陶冶,任曉峰.  病毒學(xué)報(bào). 2013(01)



本文編號(hào)：3342213