目的:探討法尼醇X受體（farnesoid X receptor,FXR）在齊墩果酸誘導(dǎo)的小鼠膽汁淤積型肝損傷中的作用。方法:將雄性野生型小鼠（wild type,WT）和雄性FXR敲除小鼠（FXR-/-）隨機(jī)分為空白組（玉米油,C）,齊墩果酸低劑量組（457 mg/kg,L）和齊墩果酸高劑量組（685.5 mg/kg,H）。每天定時(shí)灌胃一次。分別在齊墩果酸單次給藥3 h后以及齊墩果酸連續(xù)給藥4天,末次給藥3 h和末次給藥24 h后取材。采用生化試劑盒檢測血清生化指標(biāo);HE染色觀察肝組織形態(tài)變化;采用UPLC-MS技術(shù)分析肝組織、血清及膽汁中膽汁酸組分變化;RT-PCR檢測膽汁酸相關(guān)基因表達(dá)以及采用Western blot法檢測BSEP膜蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.齊墩果酸連續(xù)給藥4天,末次給藥24 h:WT小鼠中,與空白組比,齊墩果酸高劑量組ALT、AST、ALP及TBA水平升高,病理見肝細(xì)胞大面積壞死。FXR-/-小鼠中,與空白組比,齊墩果酸高劑量組ALT、AST和ALP水平升高,病理見肝細(xì)胞腫脹。與WT小鼠齊墩果酸高劑量組比較,FXR-/-小鼠齊墩果酸高劑量組ALT、AST、ALP及TB... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

膽汁酸腸肝循環(huán)及FXR調(diào)節(jié)示意圖

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文馮紅182結(jié)果2.1FXR-/-小鼠基因鑒定結(jié)果利用瓊脂糖凝膠電泳鑒定子代小鼠基因型。根據(jù)Marker示：WT小鼠為200bp，F(xiàn)XR-/-小鼠為250bp，以及與WT小鼠和已鑒定過的FXR-/-小鼠進(jìn)行對照。由圖2可知，子代小鼠鑒定均為純合子，可用于后續(xù)試驗(yàn)。圖2.FXR-/-小鼠基因鑒定。Marker顯示W(wǎng)T為200bp，F(xiàn)XR-/-小鼠為250bp。泳道1：FXR-/-小鼠對照；泳道2：WT小鼠對照；泳道3-13：子代小鼠鼠尾DNA.Fig.2.PCRgenotypingofFXR-/-mice.MarkershowedWTmice200bp,FXR-/-mice250bp.Lane1:FXR-/-mice;Lane2:WTmice;Lanes3-13:offspringmiceDNAsamples.2.2WT小鼠和FXR-/-小鼠對齊墩果酸誘導(dǎo)的膽汁淤積型肝損傷的敏感性分析2.2.1齊墩果酸連續(xù)給藥4天，末次給藥24h對WT小鼠和FXR-/-小鼠體重及肝臟指數(shù)的影響實(shí)驗(yàn)期間，WT小鼠齊墩果酸高劑量組活動(dòng)逐漸減少，反應(yīng)遲鈍，其余各組小鼠無特殊。如圖3：WT小鼠中，與空白組比較，齊墩果酸高劑量組小鼠體重降低，肝臟腫大，肝臟指數(shù)增加（P<0.05），提示小鼠肝臟損傷。膽囊增大且重量增加（P<0.05），膽汁呈墨綠色，提示可能存在膽汁淤積[28]；FXR-/-小鼠中，與空白組相比，齊墩果酸高劑量組肝臟指數(shù)增加（P<0.05），體重及膽囊重量無明顯變化（P>0.05）；與WT小鼠齊墩果酸高劑量組相比，F(xiàn)XR-/-小鼠齊墩果酸高劑量組膽囊縮小，膽囊重量降低（P<0.05），提示FXR-/-小鼠膽汁淤積程度輕。

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文馮紅19圖3.齊墩果酸連續(xù)給藥4天，末次給藥24h后小鼠體重與肝臟指數(shù)的變化。（C：空白組；L：齊墩果酸低劑量組；H：齊墩果酸高劑量組；±SEM，n=8；與空白組比較，*P<0.05；與WT小鼠比較，#P<0.05）。Fig.3.Changesinmouseweightandliverindexafteroleanolicacidcontinuousadministrationfor4days,and24hoursafterthelastdose.(C:controlgroup;L:oleanolicacidlowdosegroup;H:oleanolicacidhighdosegroup;±SEM,n=8;*P<0.05vs.controlgroup;#P<0.05vs.WTmice).2.2.2齊墩果酸連續(xù)給藥4天，末次給藥24h對WT小鼠和FXR-/-小鼠血清生化的影響血清ALT、AST、ALP及TBA均是反應(yīng)膽汁淤積型肝損傷的常見指標(biāo)，ALP>2倍正常上限（ULN）為膽汁淤積型肝損傷的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。如圖4：WT小鼠中，與空白組比較，給藥后血清ALT、AST、ALP及TBA水平均增加，其中齊墩果酸高劑量組增加更顯著（P<0.05），且ALP為2.37倍ULN，表明齊墩果酸高劑量組小鼠產(chǎn)生了膽汁淤積型肝損傷，齊墩果酸誘導(dǎo)小鼠膽汁淤積型肝損傷模型成功[29]；FXR-/-小鼠中，與空白組相比，齊墩果酸高劑量組ALT、AST與ALP水平明顯升高（P<0.05），ALP為1.45倍ULN；與WT小鼠齊墩果酸高劑量組比較，F(xiàn)XR-/-小鼠齊墩果酸高劑量組ALT、AST、ALP及TBA水平降低（P<0.05）。結(jié)果提示高劑量齊墩果酸未誘導(dǎo)FXR-/-小鼠膽汁淤積型肝損傷。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]降黃合劑Ⅱ號對肝內(nèi)膽汁淤積大鼠肝損傷及肝組織中NTCP和BSEP表達(dá)的影響[J]. 席奇,楊璇,李京濤,閆曙光,魏海梁,李日向,常占杰.  現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2020(09)
[2]藥物性膽汁淤積型肝損傷的研究進(jìn)展[J]. 吳文曉,王婷,耿興超,李波.  中國新藥雜志. 2020(02)
[3]膽汁淤積的分子機(jī)制與治療靶點(diǎn)[J]. 周學(xué)謙,陳文生.  內(nèi)科理論與實(shí)踐. 2018(06)
[4]膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和代謝酶在膽汁淤積中的作用機(jī)制[J]. 吳桂馨,王玲玲,林以寧.  海峽藥學(xué). 2018(04)
[5]復(fù)方苦參針治療肝內(nèi)膽汁淤積性肝病的臨床研究[J]. 何義華.  天津藥學(xué). 2018(01)
[6]核受體FXR調(diào)控SHP的機(jī)制及FXR-SHP軸在肝臟中作用的研究進(jìn)展[J]. 張峻崎,祁飛,徐加敏,楊依娜,唐映梅.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2018(03)
[7]蛇草赤芍湯治療膽汁淤積性肝炎的臨床療效觀察[J]. 孫雪英,彭昌樂,劉煒,劉貴海,李鑫,高輝,房陽,劉宏,遲敬,劉湘珍,李紅豆.  中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志. 2018(02)
[8]比較藥物性肝損傷的不同臨床分型方法[J]. 邢敏丹,李嘉,李謙,高敏,文君.  世界華人消化雜志. 2017(33)
[9]合并慢性膽汁淤積性肝病對慢性藥物性肝損害患者臨床表現(xiàn)及對治療應(yīng)答的影響[J]. 陳杰,范作鵬,梁珊,聶巍,仇麗霞,楊海霞,林偉,劉義榮,張晶,胡中杰.  實(shí)用肝臟病雜志. 2017(06)
[10]丹參酮膠囊對α-萘異硫氰酸酯所致肝內(nèi)膽汁淤積小鼠肝損傷的影響及機(jī)制初步研究[J]. 樊玉娟,張志榮,張林林,譚波,李玥,蔣健,裘福榮.  中國藥學(xué)雜志. 2017(15)

博士論文
[1]黃芩苷在雌激素誘導(dǎo)肝內(nèi)膽汁淤積大鼠中的干預(yù)機(jī)制和藥動(dòng)學(xué)研究[D]. 張程亮.華中科技大學(xué) 2018
[2]人源誘導(dǎo)型肝樣細(xì)胞（hiHep）進(jìn)行膽汁淤積性肝損傷的研究[D]. 倪萱.中國科學(xué)院大學(xué)(中國科學(xué)院上海藥物研究所) 2017
[3]穿心蓮內(nèi)酯對ANIT誘導(dǎo)的大鼠肝損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D]. 王雷.大連醫(yī)科大學(xué) 2016

碩士論文
[1]金釵石斛總生物堿對高脂飲食模型小鼠膽汁酸代謝的影響與機(jī)制研究[D]. 黃思.遵義醫(yī)科大學(xué) 2019
[2]基于FXR、代謝酶和轉(zhuǎn)運(yùn)體探討茵梔黃口服液對環(huán)孢素A誘導(dǎo)的膽汁淤積性肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)制[D]. 秦琰杰.華中科技大學(xué) 2019
[3]齊墩果酸代謝機(jī)制及代謝毒性相關(guān)性研究[D]. 邱敏.遵義醫(yī)學(xué)院 2017
[4]長期給予齊墩果酸對小鼠的肝毒性研究[D]. 徐亞沙.遵義醫(yī)學(xué)院 2016
[5]疏水性膽汁酸致新生鼠肝線粒體活性氧產(chǎn)生與膜通透性轉(zhuǎn)換的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 張秉宜.蘇州大學(xué) 2007



本文編號：3315315