發(fā)布時間：2021-07-23 06:32

　　背景:癲癇是由各種原因?qū)е碌哪X部神經(jīng)元高度同步化異常放電的慢性腦部疾病,具有較高的患病率、致殘率、死亡率。反復發(fā)作的癲癇可加重腦神經(jīng)元的損傷,據(jù)報道自噬可能參與了癲癇后腦損傷的病理生理機制。適度的自噬對機體維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)起著不可或缺的作用,但是過度激活的自噬反而會造成機體細胞的死亡。有研究顯示自噬可能是癲癇后海馬神經(jīng)元死亡的原因且與癲癇后腦損傷密不可分。目前臨床以抗癲癇藥治療為主,但缺乏很有效的腦保護劑。因此把自噬作為靶點來尋求有效的治療藥物是今后研究中不可忽視的新方向。天麻素（GAS）,是天麻中最重要的生物活性成分,臨床用于治療頭痛、頭暈等疾病。有研究顯示在雙側(cè)頸總動脈結扎誘導的血管性癡呆（VD）模型中,天麻素通過抑制自噬減輕海馬神經(jīng)元損傷。這提示我們天麻素可能通過抑制自噬減輕癲癇后腦損傷,但具體作用及機制仍需進一步研究。本研究旨在觀察自噬在癲癇持續(xù)狀態(tài)（SE）中的表達特點及天麻素對癲癇持續(xù)狀態(tài)后腦損傷的作用,從而為探索癲癇腦損傷的發(fā)病機制及臨床治療提供新的思路和實驗依據(jù)。方法:（1）本實驗通過建立匹魯卡品誘導的癲癇持續(xù)狀態(tài)（SE）模型,選擇56只雄性C57BL/6黑色小鼠,將小鼠... 

【文章來源】：延安大學陜西省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

哺乳動物細胞內(nèi)三種類型的細胞自噬Fig.1-1Threetypesofautophagyinmammaliancells

第一章引言-8-傷出血性、海人酸等癲癇模型中也被證實存在海馬區(qū)神經(jīng)元自噬活性增加[72]，其具體的致病機制可能為癲癇發(fā)作后誘發(fā)氧化應激，機體在氧化應激情況下，激發(fā)自噬，從而造成細胞死亡[73]。最新研究顯示用高遷移率群蛋白(highmobilitygroupbox-1，HMGB1)抗體處理后可減輕癲癇大鼠海馬損傷和細胞凋亡，同時伴有LC3、Beclin-1、ATG5、ATG7水平降低，而p62水平升高，說明了HMGB1可誘導癲癇小鼠自噬增加[74]。另一項研究表明尼洛替尼可能通過抑制自噬，如誘發(fā)了癲癇潛伏期的增加，降低Beclin-1的表達等，對戊四唑誘發(fā)的癲癇具有良好的神經(jīng)保護和抗癲癇作用[75]。綜上所述，癲癇后氧化應激被清除及通過調(diào)控自噬上游分子來抑制自噬均可能具有阻止腦損傷作用，所以自噬本身以及在自噬上游的調(diào)控，都是在今后研究新藥物或者尋求新治療靶點中不可忽視的新方向。3.天麻素天麻素（gastrosin，GAS）是一種簡單的酚苷類化合物，它被認為是從天麻中提取的主要和最重要的生物活性成分[76]。自古以來，天麻素作為鎮(zhèn)靜、抗驚厥、鎮(zhèn)痛、眩暈、癲癇、破傷風等病癥的治療藥物被廣泛應用于臨床[77]。近年研究發(fā)現(xiàn)[78]天麻素對阿爾茨海默并帕金森并情感性精神障礙、腦缺血再灌注、認知障礙等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的臨床前模型治療有效。同時，對于心血管疾病的治療也有一定的作用，然而天麻素對癲癇腦損傷的作用尚未有研究報道，需對其作用進一步研究，為癲癇的治療增添思路。3.1天麻素的結構及物化性質(zhì)天麻素的分子式為C13H18O7，分子量為286kda，其化學結構為4-羥甲基苯甲醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，結構式如圖1-2，其易溶于甲醇、乙醇和水，難溶于氯仿和乙醚。圖1-2天麻素的分子結構Fig.1-2Themolecularstructureofgastrodin

天麻素對小鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬組織自噬的作用及機制-23-第三章實驗結果3.1癲癇持續(xù)狀態(tài)小鼠模型的建立3.1.1行為學觀察正常對照組未出現(xiàn)癲癇發(fā)作，模型組小鼠均在第一次給予匹魯卡品后不同時間段出現(xiàn)咀嚼，動須；隨后出現(xiàn)豎毛，節(jié)律性點頭及洗臉樣動作；之后表現(xiàn)為伸頸，單側(cè)或雙側(cè)前肢陣攣、伸直和尾巴僵直；進一步出現(xiàn)后肢直立；最后出現(xiàn)全身強直-陣攣性發(fā)作伴站立、跌倒，反復發(fā)作。達到IV級-V級且反復發(fā)作均持續(xù)2小時，達到癲癇持續(xù)狀態(tài)(statusepilepticus，SE)，表示造模成功。圖3-1癲癇持續(xù)狀態(tài)小鼠示意圖Fig.3-1statusepilepticusmice3.2癲癇持續(xù)狀態(tài)小鼠海馬組織中Beclin-1及LC3的表達變化3.2.1癲癇持續(xù)狀態(tài)小鼠海馬組織中Beclin-1mRNA的表達變化小鼠SE后6h、12h、24h、48h、72h、96h取腦中海馬組織，提取RNA后應用TBGreen嵌合熒光法的qRT-PCR進行檢測Beclin-1mRNA的表達。結果顯示，與對照組相比，小鼠海馬組織的Beclin-1mRNA的表達在小鼠SE后72h達到最高，96h開始下降，但仍高于對照組（圖3-2/Fig.3-2，P<0.05）。

【參考文獻】：
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博士論文
[1]Nrf2激動劑通過促進自噬對泛素化蛋白聚合物的清除保護氧化應激誘導的胰島β細胞損傷的作用及機制[D]. 李文娟.山東大學 2014

碩士論文
[1]天麻素通過抑制自噬減輕大鼠心肌缺血/再灌注損傷的作用研究[D]. 何花.昆明醫(yī)科大學 2015



本文編號：3298800