本文關(guān)鍵詞：日蟾蜍它靈抑制肺癌細(xì)胞中COX-2表達(dá)機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:日蟾蜍它靈(CS-6),為中藥蟾酥中主要的蟾蜍甾烯內(nèi)酯類(lèi)成分。由于其較為理想的代謝穩(wěn)定性和較少的副作用,在癌癥的治療方面表現(xiàn)出極強(qiáng)的潛力。然而,目前對(duì)CS-6的抗腫瘤活性的作用機(jī)制仍然知之甚少。本實(shí)驗(yàn)探討CS-6對(duì)肺癌A549細(xì)胞的毒性作用以及抑制細(xì)胞生長(zhǎng)作用的分子機(jī)制。方法:在本實(shí)驗(yàn)中,采用MTT法檢測(cè)不同濃度日蟾蜍它靈(CS-6)處理人肺癌細(xì)胞A549、H1299和H322后的細(xì)胞活力;同時(shí)也檢測(cè)CS-6對(duì)人正常肺組織細(xì)胞HLF細(xì)胞活力的影響。通過(guò)細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn),細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞凋亡檢測(cè),研究CS-6對(duì)非小細(xì)胞肺癌抑制作用的生物學(xué)功能。在分子機(jī)制研究中,運(yùn)用激光共聚焦免疫熒光技術(shù),DNA-蛋白質(zhì)相互結(jié)合Pulldown分析方法以及染色質(zhì)免疫共沉淀方法,研究CS-6作用于A549細(xì)胞,對(duì)其轉(zhuǎn)錄因子NF-κB p50/p65的核定位和轉(zhuǎn)移及其與轉(zhuǎn)錄共活化子p300的相互作用,以及它們結(jié)合到COX-2啟動(dòng)子區(qū)域變化的影響。為了尋找CS-6的作用靶點(diǎn),本實(shí)驗(yàn)采用分子對(duì)接方法,在體外模擬CS-6與IKKβ的相互作用。利用異種荷瘤小鼠實(shí)驗(yàn),研究CS-6體內(nèi)抑制腫瘤生長(zhǎng)的活性及分子機(jī)制。采用Western blot方法檢測(cè)經(jīng)CS-6處理后,細(xì)胞蛋白質(zhì)水平的變化。結(jié)果:日蟾蜍它靈(CS-6)能夠顯著抑制非小細(xì)胞肺癌中COX-2的表達(dá),其機(jī)制為CS-6作用于IKKβ與ATP結(jié)合位點(diǎn),抑制其磷酸化,從而抑制NF-κB結(jié)合到COX-2的啟動(dòng)子區(qū)以及p300的募集,影響轉(zhuǎn)錄和翻譯過(guò)程。此外,CS-6還能通過(guò)激活細(xì)胞色素C和caspase依賴(lài)的細(xì)胞凋亡途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,CS-6能夠顯著抑制異種移植裸小鼠腫瘤組織中COX-2和磷酸化NF-κB p65的表達(dá)水平,以及降低荷瘤小鼠腫瘤的大小和重量。結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)日蟾蜍它靈(CS-6)能夠顯著抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中COX-2的表達(dá),其作用機(jī)制為抑制IKK?/NF-κB信號(hào)通路。本研究表明,日蟾蜍它靈(CS-6)具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,并可能被設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)為治療由COX-2介導(dǎo)的疾病的新藥物,如肺癌。
【關(guān)鍵詞】：日蟾蜍它靈 非小細(xì)胞肺癌 COX-2 NF-κB IKKβ
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R285
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-13
• 材料和方法13-25
• 1.材料13-16
• 1.1 細(xì)胞13
• 1.2 藥品及試劑13-14
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器14-15
• 1.4 所需溶液15-16
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法16-24
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)16-17
• 2.2 MTT法測(cè)定細(xì)胞活力17
• 2.3 體外遷移實(shí)驗(yàn)17-18
• 2.4 克隆形成實(shí)驗(yàn)18
• 2.5 細(xì)胞凋亡檢測(cè)18-19
• 2.6 Western blot分析19
• 2.7 激光共聚焦免疫熒光19-20
• 2.8 DNA-蛋白質(zhì)相互結(jié)合Pulldown分析方法20-21
• 2.9 mRNA提取21
• 2.10 染色質(zhì)共沉淀21-22
• 2.11 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)22-24
• 3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析24-25
• 結(jié)果25-36
• 1. CS-6 抑制NSCLC細(xì)胞增殖并改變細(xì)胞形態(tài)25-26
• 2. CS-6 抑制NSCLC克隆形成和遷移26
• 3. CS-6 通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞色素C/ Caspase信號(hào)通路誘導(dǎo)凋亡26-28
• 4. CS-6 抑制NSCLC細(xì)胞中COX-2 的表達(dá)28-32
• 5. CS-6 抑制NF-κB和p300的易位及其與COX-2 啟動(dòng)子結(jié)合32-34
• 6. CS-6 靶向作用于ATP結(jié)合位點(diǎn)抑制IKKβ 的活性34-36
• 7. CS-6 在裸鼠中抑制肺癌異種移植物的生長(zhǎng)36
• 討論36-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 綜述45-59
• 綜述參考文獻(xiàn)52-59
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況59-60
• 致謝60-61

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2 王繼營(yíng),高珊,崔黎,黃麗春,宋立友;“雙異”聯(lián)合治療晚期非小細(xì)胞肺癌37例[J];中國(guó)肺癌雜志;2000年02期

3 田靜,李蓓蘭;老年晚期非小細(xì)胞肺癌的化療:一種新趨勢(shì)[J];中國(guó)肺癌雜志;2000年05期

4 張世雯,周清華;不同的分割方案與化療聯(lián)合治療非小細(xì)胞肺癌[J];中國(guó)肺癌雜志;2000年05期

5 胡發(fā)明,華波;血清白介素-10水平是晚期非小細(xì)胞肺癌病人的一項(xiàng)預(yù)后因素[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊(cè));2000年11期

6 于亮,王梅,張燦灼;微血管在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年04期

7 朱建英;預(yù)計(jì)2009年非小細(xì)胞肺癌藥物市場(chǎng)將達(dá)20億美元[J];國(guó)外醫(yī)藥(合成藥 生化藥 制劑分冊(cè));2001年02期

8 張利偉,劉樹(shù)秋,陳海英,萬(wàn)錦華;立體定向適形放療配合常規(guī)放療治療非小細(xì)胞肺癌近期療效分析[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2001年05期

9 王肇炎;晚期非小細(xì)胞肺癌的解救化療[J];腫瘤研究與臨床;2001年01期

10 朱堯武,楊宇飛;非小細(xì)胞肺癌的術(shù)后輔助治療[J];中國(guó)臨床醫(yī)生;2001年12期

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1 張新民;唐蜜;李代強(qiáng);;磷酸化酪氨酸蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其意義[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

2 胡旭東;楊國(guó)仁;霍宗偉;方永存;陳鳴陸;;~(99m)Tc-MIBI SPECT顯像觀(guān)察非小細(xì)胞肺癌多藥耐藥的研究[A];首屆全國(guó)腫瘤核醫(yī)學(xué)新技術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

3 秦慶亮;熊海健;王愛(ài);邊海蓉;盧振國(guó);楊培英;朱斌耀;王蕓;;立體定向放射治療放療后復(fù)發(fā)非小細(xì)胞肺癌[A];2007第六屆全國(guó)放射腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

4 馮耘;萬(wàn)歡英;高蓓莉;項(xiàng)軼;劉嘉琳;;血管緊張素轉(zhuǎn)換酶二在非小細(xì)胞肺癌腫瘤生長(zhǎng)和血管生成中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)胸部腫瘤及內(nèi)窺鏡學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

5 ;非小細(xì)胞肺癌術(shù)后輔助治療及一線(xiàn)治療[A];天津市抗癌協(xié)會(huì)肺癌專(zhuān)業(yè)委員會(huì)2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2011年

6 蔣峰;許林;史美祺;;1560例非小細(xì)胞肺癌患者多因素預(yù)后分析[A];第13屆全國(guó)肺癌學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2013年

7 張華;;術(shù)前中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞比值對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的影響[A];第13屆全國(guó)肺癌學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2013年

8 王子平;;老年晚期非小細(xì)胞肺癌治療思考[A];第三屆中國(guó)腫瘤內(nèi)科大會(huì)教育集暨論文集[C];2009年

9 張沂平;;非小細(xì)胞肺癌個(gè)體化化療[A];2009年浙江省腫瘤學(xué)術(shù)年會(huì)暨腫瘤診治新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

10 劉嘉湘;施志明;李和根;徐振曄;朱晏偉;趙麗紅;高虹;劉苓霜;朱惠蓉;張暉;;益肺抗瘤飲治療271例非小細(xì)胞肺癌臨床觀(guān)察[A];中醫(yī)藥優(yōu)秀論文選（下）[C];2009年

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1 記者 李穎;特羅凱對(duì)中國(guó)非小細(xì)胞肺癌患者效果佳[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

2 曉白;非小細(xì)胞肺癌研究獲重大進(jìn)展[N];人民日?qǐng)?bào);2008年

3 記者 張文天;非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)藥綜合醫(yī)療方案研究進(jìn)展順利[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

4 辛勇　張先穩(wěn);早期非小細(xì)胞肺癌的治療進(jìn)展[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2004年

5 記者高新軍;專(zhuān)家提出 建非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)臨床指南[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2009年

6 上海長(zhǎng)海醫(yī)院呼吸科 夏陽(yáng) 整理 邱志濤;非小細(xì)胞肺癌放虎歸山還是乘勝追擊[N];健康報(bào);2013年

7 記者 王丹;新研究揭示炎癥促非小細(xì)胞肺癌發(fā)生機(jī)制[N];健康報(bào);2014年

8 記者 李穎;凱美納成晚期非小細(xì)胞肺癌治療優(yōu)選方案[N];科技日?qǐng)?bào);2014年

9 白京麗;非小細(xì)胞肺癌最佳治療方案[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2000年

10 ;表皮生長(zhǎng)因子受體抑制劑在治療非小細(xì)胞肺癌中的作用[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 白艷（Bai Sally）;整合素αvβ5合并EGFR檢測(cè)用于非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后評(píng)估的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

2 王筱恬;PLZF和DACH1的異常表達(dá)影響非小細(xì)胞肺癌發(fā)生與發(fā)展的分子機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

3 洪專(zhuān);木犀草素治療EGF受體繼發(fā)性突變的非小細(xì)胞肺癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京大學(xué);2014年

4 張沛;ILT4在非小細(xì)胞肺癌中的作用及分子機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

5 王世坤;RBP2誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌和食管鱗癌表皮間質(zhì)化[D];山東大學(xué);2015年

6 趙世俊;~(18)F-FDG PET/CT在非小細(xì)胞肺癌預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

7 邱晨;影響非小細(xì)胞肺癌手術(shù)后遠(yuǎn)期生存的相關(guān)因素分析[D];山東大學(xué);2015年

8 姜遠(yuǎn)矚;術(shù)前血液學(xué)指標(biāo)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后關(guān)系的研究[D];山東大學(xué);2015年

9 朱良明;STAT3及其靶基因?qū)Ψ切〖?xì)胞肺癌生物學(xué)行為調(diào)控機(jī)制的初步實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2015年

10 周菊;HPV-16感染對(duì)非小細(xì)胞肺癌和A549細(xì)胞的影響及miRNAs表達(dá)改變的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

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1 王勇;誘導(dǎo)型一氧化氮合酶在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的臨床意義[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2006年

2 陳婷;非小細(xì)胞肺癌調(diào)強(qiáng)放射治療預(yù)后因素分析[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

3 王波;單向式全胸腔鏡下解剖性肺葉切除術(shù)治療早期非小細(xì)胞肺癌的學(xué)習(xí)曲線(xiàn)[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 施桂清;血管內(nèi)皮抑制素聯(lián)合放化療治療非小細(xì)胞肺癌的療效及安全性研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 王靜;Eg5、Ki-67在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 覃建穎;IL-21和Tc1細(xì)胞在非小細(xì)胞肺癌患者外周血及癌灶中的變化及相互作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

7 張瑞;ⅢA-N2期非小細(xì)胞肺癌手術(shù)治療和放射治療的療效對(duì)比及相關(guān)預(yù)后因素的分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

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10 王婷婷;細(xì)胞因子活化殺傷細(xì)胞治療非小細(xì)胞肺癌臨床研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：日蟾蜍它靈抑制肺癌細(xì)胞中COX-2表達(dá)機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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