目的:通過觀察骨質(zhì)疏松癥模型大鼠的骨密度、骨生物力學指標、骨代謝指標、氧化應激指標的表達,基于AGEs/RAGE/NF-κB通路探討培本固疏方抗骨質(zhì)疏松的作用機制。方法:將42只SD雌性大鼠按體重隨機分為假手術(shù)組、模型對照組、培本固疏方低、中、高劑量組和西藥組,每組7只。采用去雙側(cè)卵巢法建立骨質(zhì)疏松模型,假手術(shù)組僅切除卵巢旁脂肪組織約1。造模4周后施行干預,大鼠等效劑量按成人每日服用劑量的6.3倍進行換算。培本固疏方低劑量組:含培本固疏方生藥5.30g/Kg/d灌胃,培本固疏方中劑量組:含培本固疏方生藥10.61g/Kg/d灌胃,培本固疏方高劑量組:含培本固疏方生藥21.21g/Kg/d灌胃,西藥組:阿侖膦酸鈉水溶液1L/Kg/d灌胃。假手術(shù)組和模型對照組:給予等容量0.9%生理鹽水0.5mL/100g灌胃。各組藥劑均隔水溫熱后灌胃,灌胃持續(xù)8周后,計算子宮指數(shù),測定股骨骨密度及股骨生物力學彈性載荷、極限載荷、彈性模量等指標;采用ELISA法測定血清骨代謝指標TRACP5b、sRANKL、OPG及氧化應激指標MDA、AGEs的含量;采用Western Blot法檢測NF-κB、NFAT... 

【文章來源】：南京中醫(yī)藥大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１：?ＡＧＥｓ／ＲＡＧＥ激活ＮＦ－ｋＢ信號轉(zhuǎn)導通路??

?南京中醫(yī)藥大學碩士學位論文???－產(chǎn)秘』＇??：書ｖ??？?．？?ｓ＾＝４，＂??圖２－１陰道涂片染色結(jié)果（ｘ３０）??１．２．２分組及干預??大鼠稱重后按體重由輕到重進行編號，將體重相鄰６只分為１個區(qū)組，各區(qū)組內(nèi)參照??隨機數(shù)字表進行隨機分組，分成假手術(shù)組（Ｃ組）、模型對照組（Ｄ組）、培本固疏方低??劑量組（Ｅ組）、培本固疏方中劑量組（Ｆ組）、培本固疏方高劑量組（Ｇ組）和西藥組??（Ｈ組），每組７只。各組大鼠自由飲食、自然光照，每周稱重１次。各組均于造模４周??后施行干預。??大鼠用藥等效劑量按成人每日服用劑量的６．?３倍進行換算。培本固疏方低劑量組：含培??本固疏方生藥５．３０ｇ／Ｋｇ／ｄ灌胃，培本固疏方中劑量組：含培本固疏方生藥１０．６１ｇ／Ｋｇ／ｄ灌胃，??培本固疏方高劑量組：含培本固疏方生藥２１．２１ｇ／Ｋｇ／ｄ灌胃，西藥組：阿侖膦酸鈉水溶液??ｌｍＬ／Ｋｇ／ｄ灌胃。假手術(shù)組和模型對照組：給予等容量０．９％生理鹽水０．５ｍＬ／１００?ｇ灌胃。各??組藥劑均隔水溫熱后灌胃，持續(xù)灌胃８周：７１］。??１．２?Ｊ標本采集及測定方法??大鼠末次干預后，禁食２４ｈ，次日取材。取材前將大鼠稱重，麻醉方法同造模，腹主??動脈抽血，處死。??１．２．３．１骨密度檢測??仔細快速分離肌肉等軟組織，取出完整左側(cè)股骨，浸泡于含有生理鹽水的標本袋中，??４°Ｃ保存。將新鮮股骨標本統(tǒng)一方位放于有機玻璃盒支架上固定，股骨全長的１／２處作為股??骨中段的測量點，股骨全長的中上１／４處作為股骨近端的測量點，用ＭＥＤＩＸ－９０雙能Ｘ線??骨密度儀掃描，得出骨密度值（ＢＭＤ），連續(xù)測量２次，計算變異系數(shù)的均方根表示股骨

?第二部分實驗研究???０?１４０?／??／？Ｔ�。祝�??０１２０?／??ｗｉｗｅｃ；?／??０?１００?／??０．０８０?／??Ｚ?／??一?０．０６０?／??｜?／??０．０４０?／??０．０２０?／??０．０００?一’ｆ??????－０?２００?０?００〇／〇?２００?０?４０Ｃ?０?６００?０?８００?１?０００?１?２００?１?４００??——ｉ—?ｉ???ｎ?－?ｍ?—??－０．０２０?／??位移（ｍｍ）??圖２－２載荷－位移曲線圖??１．２．３．３血清代謝指標??血液標本采集后于４°Ｃ冰箱靜置４－６小時，以３０００轉(zhuǎn)／分鐘速度離心１０分鐘，取其上??清液。用酶聯(lián)免疫法參照說明書逐步進行，檢測血清骨代謝指標ｓＲＡＮＫＬ、ＯＰＧ、ＴＲＡＣＰ５ｂ??的含量以及氧化應激指標ＡＧＥｓ、ＭＤＡ的含量。??１．２．３．４子宮指數(shù)??仔細剔除子宮周圍脂肪組織后稱重，計算子宮指數(shù)。子宮指數(shù)＝子宮濕重／大鼠體重Ｘ??１００％。??１．２．３．５骨組織ＮＦ－ｋＢ蛋白及ＮＦＡＴｃ－１蛋白的表達（ＷＢ）??（１）冰箱中取出左側(cè)股骨標本，剪下股骨近端１／５左右，剔除表面組織及骨髓等，在??預冷的ＰＢＳ中漂洗數(shù)次。稱重后剪碎放進研缽中磨成粉末，放入組織勻漿器中按每２０ｍｇ??加入２００ｕｌ±２０ｕｌ裂解液，勾衆(zhòng)后在冰上震蕩裂解３０ｍｉｎ，充分裂解至溶液清澈無粘稠。４°Ｃ??卜１２０００轉(zhuǎn)／ｍｉｎ離心ｌＯｍｉｎ，取上清。??（２）用ＢＣＡ法測定蛋白濃度，而后用ＰＢＳ緩沖液調(diào)整濃度，沸水煮ｌＯｍｉｎ后放于冰??上冷卻，１２０００轉(zhuǎn)／ｍｉｎ離心２ｍｉｎ后取上清置于－２０°Ｃ冰箱保存。??

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碩士論文
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本文編號：3297794