目的:探討肝癌細(xì)胞中ADAR1是否參與干擾素抑制HBV作用。方法:1.通過不同濃度Ⅰ、Ⅱ型干擾素（IFN-α:0、200、500、1000、2000U/ml、IFN-β:0、200、1000U/ml、IFN-γ:0、200、1000U/ml）以及IFN-α不同處理時(shí)間（0、2、4、8、16h）作用HepG2肝癌細(xì)胞后Western blot和RT-qPCR檢測ADAR1的表達(dá)情況。2.IFN-α作用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HBV復(fù)制質(zhì)粒的Huh7肝癌細(xì)胞,通過Southern blot檢測HBV復(fù)制中間體水平,ELISA法檢測HBsAg水平。3.在Huh7細(xì)胞中干擾ADAR1的表達(dá)后瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HBV復(fù)制質(zhì)粒,IFN-α作用后Western blot檢測ADAR1的表達(dá)情況,Southern blot檢測HBV復(fù)制中間體水平。4.通過轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)分析Huh7.5.1細(xì)胞中ADAR1敲除前后相關(guān)基因的表達(dá)并驗(yàn)證。結(jié)果:1.mRNA水平,IFN-α和IFN-β可以誘導(dǎo)ADAR1的表達(dá),且IFN-α對ADAR1的表達(dá)具有濃度依賴性,而IFN-γ未對ADAR1 mRNA水平產(chǎn)生影響。2.蛋白水平,IFN-α和... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

2IFN-β對ADAR1蛋白水平表達(dá)的影響（a:P<0.05b:P<0.01）

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文202.2.3IFN-γ對ADAR1蛋白水平表達(dá)的影響我們通過濃度梯度0、200、1000U/ml的IFN-γ處理HepG2細(xì)胞，第二日提取細(xì)胞總蛋白，Westernblot檢測ADAR1蛋白水平。結(jié)果顯示IFN-γ未誘導(dǎo)產(chǎn)生ADAR1P150蛋白并且對ADAR1P110蛋白水平影響較小，未具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。圖2.2.3IFN-γ對ADAR1蛋白水平表達(dá)的影響Fig2.2.3EffectsofIFN-γonADAR1expression3討論干擾素自1957年發(fā)現(xiàn)以來[30]，已逐步被證實(shí)具有調(diào)節(jié)免疫[30]、抗病毒[12,31]、影響腫瘤生長進(jìn)程[12,32]等多種生物學(xué)功能。作為分泌型蛋白，IFN的表達(dá)與其刺激劑以及細(xì)胞種類等相關(guān)[30]，不同類型的干擾素通過與其配體結(jié)合激活不同的信號傳導(dǎo)途徑從而誘導(dǎo)產(chǎn)生相應(yīng)的ISGs體系[10,30]。以IFN-α和IFN-β為主的Ⅰ型IFN主要通過誘導(dǎo)受體IFNAR1、IFNAR2二聚化[10,30]，促使IFNAR1結(jié)合鏈上的TYK2與IFNAR2結(jié)合鏈上的JAK1相互靠近發(fā)生自磷酸化和轉(zhuǎn)磷酸化而被激活[11,12]，信號以STAT1依賴[12,33-35]或非依賴[36-38]的方式傳導(dǎo)，脫離受體招募IRF9[10]，結(jié)合形成ISGF3[10]或其他復(fù)合物[36-38]，轉(zhuǎn)位入核后與ISGs的上游序列中ISRE結(jié)合以調(diào)控ISGs的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)[38]。IFN-γ則以反向平行二聚體的形式發(fā)揮其生物活性[30,31]，其受體為兩條IFNGR1結(jié)合鏈和兩條IFNGR2信號傳導(dǎo)鏈折疊形成的復(fù)合物[31]，兩者結(jié)合促使IFNGR胞內(nèi)羧基末端的JAK1/JAK2交叉磷酸化[31-33]，招募

ADAR1參與IFN-α抑制HBV復(fù)制Fig2.2ADAR1intheanti-HBVmechanismsofIFN-α

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]慢性乙型肝炎防治指南（2019年版）[J]. 王貴強(qiáng),王福生,莊輝,李太生,鄭素軍,趙鴻,段鐘平,侯金林,賈繼東,徐小元,崔富強(qiáng),魏來.  肝臟. 2019(12)
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碩士論文
[1]ADAR1調(diào)控HBV復(fù)制的研究[D]. 袁琳.重慶醫(yī)科大學(xué) 2018
[2]ADAR1在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其功能研究[D]. 劉藻濱.第四軍醫(yī)大學(xué) 2013



本文編號：3297249