目的運用動物模型為研究對象,使用Western blot、ELISA、rt-PCR等技術(shù),測定血管性認知功能障礙大鼠腦脊液中Srxn 1含量、大鼠腦海馬組織Srxn 1的蛋白質(zhì)表達水平的變化情況,探討Sulfiredoxin-1（Srxn1）與認知功能障礙嚴重程度的相關(guān)性。方法1、模型制作:普通級健康雄性SD大鼠66只,周齡6w,體質(zhì)量230²70g,大鼠分籠適應性喂養(yǎng)5d,正常光照,自由飲水和攝食,溫度22℃,相對濕度50%⁷0%。將大鼠分為隨機的五組,分別用字母A、B、C、D、E代號表示;A組為空白對照組,選有6只SD大鼠,該組大鼠不予以任何處理;B組為假手術(shù)組,選有6只SD大鼠,該組大鼠的處理方式為僅分離雙側(cè)頸總動脈;C組為常規(guī)手術(shù)組,選有18只SD大鼠,對該組老鼠運用改良2-V0法結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈,從而建立VCI大鼠模型;D組為Srxn1-si RNA手術(shù)組,選有18只SD大鼠,該組大鼠同樣采用改良2-V0法結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈,不過在結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈前24h,將Srxn1基因干擾片段注射于大鼠的側(cè)腦室;E組為Nrf2-si RNA手術(shù)組... 

【文章來源】：湖南師范大學湖南省 211工程院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

頸動脈分離結(jié)扎

碩士學位論文8Nrf2-1754反義鏈:5’AGUAAGGUUUCCCAUCCUCTT3’（注意事項：1、各手術(shù)組大鼠在進行模型制備前需禁食12h及禁水4h；2、麻醉劑10%水合氯醛的配比：大鼠體重（kg）：水合氯醛（mg）=1：400，注射方式：腹腔注射；3、傷口經(jīng)縫合后，需充分消毒以及紅霉素軟膏涂抹預防感染，時刻注意無菌原則，密切觀察大鼠生命體征；4、手術(shù)結(jié)束后，待大鼠狀態(tài)穩(wěn)定后，方可送至籠中繼續(xù)飼養(yǎng)及觀察；5、整個實驗過程中，各組大鼠所飼養(yǎng)的環(huán)境以及喂養(yǎng)食物均保持一致。）圖2-1頸動脈分離結(jié)扎圖2-2側(cè)腦室注射1.2.2篩選：造模30天后采用Morris水迷宮評價大鼠的空間學習記憶能力，從而篩選出造模成功的目標VD模型。1.2.3標本的提取及制作：腦脊液和組織蛋白提�。焊鹘M大鼠用過量水合氯醛麻醉，斷頭取腦。于冰上迅速剝開顱骨，收取腦脊液于干凈的EP管內(nèi)并做好標記，同時迅速分離出腦海馬組織，在預冷的生理鹽水中漂洗后，裝于干凈的EP管中并做好標記，將腦海馬組織及腦脊液放入-80℃冰箱中保存待用。（如圖2-3、圖2-4）

Srxn1在血管性認知功能障礙大鼠模型發(fā)病過程中的變化及相關(guān)性研究9圖2-3大鼠腦脊液收集圖2-4腦海馬組織分離1.3實驗方法1.3.1Westernblot檢測Srxn1、Nrf2蛋白表達水平1、組織蛋白液的提�。簩⒏鹘M大鼠的腦海馬組織稱重后，用剪刀適當剪碎，放置一干燥的新2.5mlEP管中，加入研磨鋼珠及組織蛋白裂解液（按照每100mg大鼠腦海馬組織中加入1ml組織蛋白裂解液的比例加入適當裂解液），放置于冷凍組織研磨儀中研磨大鼠腦海馬組織，然后將裂解后的大鼠腦海馬組織裂解研磨液放置在4℃冰箱中靜置20min以上，接著放置于離心機中，按4℃，12000rpm離心lOmin，小心吸取上清液移至另一潔凈新1.5mlEP管中，此為提取得到的蛋白組織粗提取液；2、組織蛋白濃度測定：利用紫外分光光度計測定各組大鼠腦海馬組織蛋白粗提取液中濃度，按組做好標記后，加入蛋白上樣緩沖液（大鼠腦海馬組織蛋白液：蛋白上樣緩沖液比例為4:1），放置沸水中開蓋煮10min使其變性，待其冷卻至室溫后，可放置-80℃冰箱中保存；3、SDS-PAGE電泳：進行WB實驗前將組織蛋白提取液于室溫中放置30min左右；⑴清洗玻璃板：一只手扣緊玻璃板，另一只手拿抹布蘸點洗潔精輕輕擦洗。兩面都擦洗過后用自來水沖干凈，最后用蒸餾水再次沖洗一遍后立在筐里晾干。


本文編號：3291705