Srxn1在血管性認(rèn)知功能障礙大鼠模型發(fā)病過(guò)程中的變化
發(fā)布時(shí)間：2021-07-20 00:04
目的運(yùn)用動(dòng)物模型為研究對(duì)象,使用Western blot、ELISA、rt-PCR等技術(shù),測(cè)定血管性認(rèn)知功能障礙大鼠腦脊液中Srxn 1含量、大鼠腦海馬組織Srxn 1的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化情況,探討Sulfiredoxin-1（Srxn1）與認(rèn)知功能障礙嚴(yán)重程度的相關(guān)性。方法1、模型制作:普通級(jí)健康雄性SD大鼠66只,周齡6w,體質(zhì)量230270g,大鼠分籠適應(yīng)性喂養(yǎng)5d,正常光照,自由飲水和攝食,溫度22℃,相對(duì)濕度50%70%。將大鼠分為隨機(jī)的五組,分別用字母A、B、C、D、E代號(hào)表示;A組為空白對(duì)照組,選有6只SD大鼠,該組大鼠不予以任何處理;B組為假手術(shù)組,選有6只SD大鼠,該組大鼠的處理方式為僅分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈;C組為常規(guī)手術(shù)組,選有18只SD大鼠,對(duì)該組老鼠運(yùn)用改良2-V0法結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈,從而建立VCI大鼠模型;D組為Srxn1-si RNA手術(shù)組,選有18只SD大鼠,該組大鼠同樣采用改良2-V0法結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈,不過(guò)在結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈前24h,將Srxn1基因干擾片段注射于大鼠的側(cè)腦室;E組為Nrf2-si RNA手術(shù)組...
【文章來(lái)源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
頸動(dòng)脈分離結(jié)扎
碩士學(xué)位論文8Nrf2-1754反義鏈:5’AGUAAGGUUUCCCAUCCUCTT3’（注意事項(xiàng)：1、各手術(shù)組大鼠在進(jìn)行模型制備前需禁食12h及禁水4h；2、麻醉劑10%水合氯醛的配比：大鼠體重（kg）：水合氯醛（mg）=1：400，注射方式：腹腔注射；3、傷口經(jīng)縫合后，需充分消毒以及紅霉素軟膏涂抹預(yù)防感染，時(shí)刻注意無(wú)菌原則，密切觀察大鼠生命體征；4、手術(shù)結(jié)束后，待大鼠狀態(tài)穩(wěn)定后，方可送至籠中繼續(xù)飼養(yǎng)及觀察；5、整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，各組大鼠所飼養(yǎng)的環(huán)境以及喂養(yǎng)食物均保持一致。）圖2-1頸動(dòng)脈分離結(jié)扎圖2-2側(cè)腦室注射1.2.2篩選：造模30天后采用Morris水迷宮評(píng)價(jià)大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力，從而篩選出造模成功的目標(biāo)VD模型。1.2.3標(biāo)本的提取及制作：腦脊液和組織蛋白提�。焊鹘M大鼠用過(guò)量水合氯醛麻醉，斷頭取腦。于冰上迅速剝開(kāi)顱骨，收取腦脊液于干凈的EP管內(nèi)并做好標(biāo)記，同時(shí)迅速分離出腦海馬組織，在預(yù)冷的生理鹽水中漂洗后，裝于干凈的EP管中并做好標(biāo)記，將腦海馬組織及腦脊液放入-80℃冰箱中保存待用。（如圖2-3、圖2-4）
Srxn1在血管性認(rèn)知功能障礙大鼠模型發(fā)病過(guò)程中的變化及相關(guān)性研究9圖2-3大鼠腦脊液收集圖2-4腦海馬組織分離1.3實(shí)驗(yàn)方法1.3.1Westernblot檢測(cè)Srxn1、Nrf2蛋白表達(dá)水平1、組織蛋白液的提�。簩⒏鹘M大鼠的腦海馬組織稱重后，用剪刀適當(dāng)剪碎，放置一干燥的新2.5mlEP管中，加入研磨鋼珠及組織蛋白裂解液（按照每100mg大鼠腦海馬組織中加入1ml組織蛋白裂解液的比例加入適當(dāng)裂解液），放置于冷凍組織研磨儀中研磨大鼠腦海馬組織，然后將裂解后的大鼠腦海馬組織裂解研磨液放置在4℃冰箱中靜置20min以上，接著放置于離心機(jī)中，按4℃，12000rpm離心lOmin，小心吸取上清液移至另一潔凈新1.5mlEP管中，此為提取得到的蛋白組織粗提取液；2、組織蛋白濃度測(cè)定：利用紫外分光光度計(jì)測(cè)定各組大鼠腦海馬組織蛋白粗提取液中濃度，按組做好標(biāo)記后，加入蛋白上樣緩沖液（大鼠腦海馬組織蛋白液：蛋白上樣緩沖液比例為4:1），放置沸水中開(kāi)蓋煮10min使其變性，待其冷卻至室溫后，可放置-80℃冰箱中保存；3、SDS-PAGE電泳：進(jìn)行WB實(shí)驗(yàn)前將組織蛋白提取液于室溫中放置30min左右；⑴清洗玻璃板：一只手扣緊玻璃板，另一只手拿抹布蘸點(diǎn)洗潔精輕輕擦洗。兩面都擦洗過(guò)后用自來(lái)水沖干凈，最后用蒸餾水再次沖洗一遍后立在筐里晾干。
本文編號(hào)：3291705
【文章來(lái)源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
頸動(dòng)脈分離結(jié)扎
碩士學(xué)位論文8Nrf2-1754反義鏈:5’AGUAAGGUUUCCCAUCCUCTT3’（注意事項(xiàng)：1、各手術(shù)組大鼠在進(jìn)行模型制備前需禁食12h及禁水4h；2、麻醉劑10%水合氯醛的配比：大鼠體重（kg）：水合氯醛（mg）=1：400，注射方式：腹腔注射；3、傷口經(jīng)縫合后，需充分消毒以及紅霉素軟膏涂抹預(yù)防感染，時(shí)刻注意無(wú)菌原則，密切觀察大鼠生命體征；4、手術(shù)結(jié)束后，待大鼠狀態(tài)穩(wěn)定后，方可送至籠中繼續(xù)飼養(yǎng)及觀察；5、整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，各組大鼠所飼養(yǎng)的環(huán)境以及喂養(yǎng)食物均保持一致。）圖2-1頸動(dòng)脈分離結(jié)扎圖2-2側(cè)腦室注射1.2.2篩選：造模30天后采用Morris水迷宮評(píng)價(jià)大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力，從而篩選出造模成功的目標(biāo)VD模型。1.2.3標(biāo)本的提取及制作：腦脊液和組織蛋白提�。焊鹘M大鼠用過(guò)量水合氯醛麻醉，斷頭取腦。于冰上迅速剝開(kāi)顱骨，收取腦脊液于干凈的EP管內(nèi)并做好標(biāo)記，同時(shí)迅速分離出腦海馬組織，在預(yù)冷的生理鹽水中漂洗后，裝于干凈的EP管中并做好標(biāo)記，將腦海馬組織及腦脊液放入-80℃冰箱中保存待用。（如圖2-3、圖2-4）
Srxn1在血管性認(rèn)知功能障礙大鼠模型發(fā)病過(guò)程中的變化及相關(guān)性研究9圖2-3大鼠腦脊液收集圖2-4腦海馬組織分離1.3實(shí)驗(yàn)方法1.3.1Westernblot檢測(cè)Srxn1、Nrf2蛋白表達(dá)水平1、組織蛋白液的提�。簩⒏鹘M大鼠的腦海馬組織稱重后，用剪刀適當(dāng)剪碎，放置一干燥的新2.5mlEP管中，加入研磨鋼珠及組織蛋白裂解液（按照每100mg大鼠腦海馬組織中加入1ml組織蛋白裂解液的比例加入適當(dāng)裂解液），放置于冷凍組織研磨儀中研磨大鼠腦海馬組織，然后將裂解后的大鼠腦海馬組織裂解研磨液放置在4℃冰箱中靜置20min以上，接著放置于離心機(jī)中，按4℃，12000rpm離心lOmin，小心吸取上清液移至另一潔凈新1.5mlEP管中，此為提取得到的蛋白組織粗提取液；2、組織蛋白濃度測(cè)定：利用紫外分光光度計(jì)測(cè)定各組大鼠腦海馬組織蛋白粗提取液中濃度，按組做好標(biāo)記后，加入蛋白上樣緩沖液（大鼠腦海馬組織蛋白液：蛋白上樣緩沖液比例為4:1），放置沸水中開(kāi)蓋煮10min使其變性，待其冷卻至室溫后，可放置-80℃冰箱中保存；3、SDS-PAGE電泳：進(jìn)行WB實(shí)驗(yàn)前將組織蛋白提取液于室溫中放置30min左右；⑴清洗玻璃板：一只手扣緊玻璃板，另一只手拿抹布蘸點(diǎn)洗潔精輕輕擦洗。兩面都擦洗過(guò)后用自來(lái)水沖干凈，最后用蒸餾水再次沖洗一遍后立在筐里晾干。
本文編號(hào)：3291705
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