目的:1.本研究擬探索miR-29b/c在急性髓細(xì)胞白血�。ˋML）中表達(dá)狀況及臨床意義;2.探討miR-29b/c在DNMT抑制劑地西他濱（DAC）耐藥中的作用。方法:1.收集102例AML患者和25例健康對照的骨髓標(biāo)本,提取骨髓單個核細(xì)胞;提取骨髓單個核細(xì)胞進(jìn)行RNA和DNA提取,并將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA;DNA進(jìn)行亞硫酸鹽修飾。2.應(yīng)用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)（RT-PCR）檢測102例AML患者和25例健康對照的骨髓單個核細(xì)胞中miR-29b/c的表達(dá)水平,并使用SPSS20.0軟件對臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。3.應(yīng)用亞硫酸氫鹽測序PCR方法（BSP）檢測K562細(xì)胞株、K562加藥株和K562耐藥株（K562/DAC）和中miR-29b/c的甲基化水平。采用RT-PCR檢測K562加藥株、K562耐藥株（K562/DAC）和K562細(xì)胞株中miR-29b/c的表達(dá)情況,分析甲基化和表達(dá)的相關(guān)性。4.構(gòu)建miR-29b和miR-29c過表達(dá)質(zhì)粒并通過HiperFect轉(zhuǎn)染miR-29b/c低表達(dá)細(xì)胞株（K562）和DAC耐藥細(xì)胞株（K562/DAC）,通過流式細(xì)胞儀和抗生素篩選獲得... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一章 引言
    1.1 急性髓系白血病（AML）
    1.2 microRNA與甲基化
    1.3 地西他濱在急性髓系白血病治療中的應(yīng)用
    1.4 地西他濱耐藥情況
    1.5 MiR-29b/c與地西他濱耐藥
第二章 研究目的、技術(shù)、方案設(shè)計、意義
    2.1 研究目的
    2.2 研究方法及技術(shù)
        2.2.1 亞硫酸氫鹽測序（Bisulfite sequencing PCR, BSP）
        2.2.2 實(shí)時熒光定量PCR（PT-PCR）
        2.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
        2.2.4 脂質(zhì)體細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)
    2.3 研究方案設(shè)計
        2.3.1 AML臨床標(biāo)本中miR-29b/c表達(dá)的檢測
        2.3.2 MiR-29b/c在DAC耐藥中的作用
    2.4 研究的意義
第三章 材料和方法
    3.1 材料
        3.1.1 研究對象
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.4 引物
    3.2 方法
        3.2.1 分離骨髓單個核細(xì)胞（BMMNCs）、提取總RNA與基因組DNA
        3.2.2 基因組DNA亞硫酸鹽修飾
        3.2.3 RNA逆轉(zhuǎn)錄（reverse transcription, RT）
        3.2.4 RT-PCR檢測miR-29b/c的表達(dá)水平（miScript SYBR Green PCR Kit， Qiagen）
        3.2.5 BSP檢測miR-29b/c的甲基化密度
        3.2.6 PCR產(chǎn)物的純化回收
        3.2.7 重組載體構(gòu)建
        3.2.8 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
        3.2.9 重組質(zhì)粒提取
        3.2.10 質(zhì)粒測序
        3.2.11 陽性模板建立
        3.2.12 細(xì)胞遺傳學(xué)檢查
        3.2.13 基因突變檢測
        3.2.14 細(xì)胞復(fù)蘇
        3.2.15 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.16 細(xì)胞傳代
        3.2.17 細(xì)胞凍存
        3.2.18 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        3.2.19 細(xì)胞計數(shù)
        3.2.20 細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn)（CCK-8）
        3.2.21 半數(shù)抑制率（IC50）檢測
        3.2.22 凋亡實(shí)驗(yàn)
        3.2.23 統(tǒng)計學(xué)處理
第四章 結(jié)果
    第一部分 MiR-29b/c在AML中的臨床意義
        4.1.1 對照組和AML患者實(shí)驗(yàn)組的miR-29b/c表達(dá)水平
        4.1.2 AML中miR-29b/c表達(dá)的ROC曲線
        4.1.3 MiR-29b/c表達(dá)水平與患者的臨床參數(shù)相關(guān)性
        4.1.4 MiR-29b/c表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性分析
    第二部分 MiR-29b/c在DAC耐藥中的作用
        4.2.1 在DAC作用下miR-29b/c在K562細(xì)胞株中的表達(dá)和甲基化水平
        4.2.2 MiR-29b/c在K562/DAC的表達(dá)和甲基化水平
        4.2.3 MiR-29b/c在各個細(xì)胞株中的表達(dá)情況
        4.2.4 構(gòu)建miR-29b/c穩(wěn)定過表達(dá)（低表達(dá)）的白血病細(xì)胞株（耐藥株）
        4.2.5 MiR-29b/c增加白血病細(xì)胞和DAC耐藥株對DAC敏感性
        4.2.6 MiR-29b/c增加白血病細(xì)胞和耐藥細(xì)胞對DAC的敏感性
        4.2.7 MiR-29b/c表達(dá)改變后轉(zhuǎn)染株細(xì)胞凋亡變化
第五章 討論
第六章 結(jié)論和展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及其他科研成果
    一.發(fā)表論文
    二.獲獎情況
    三.參與課題工作情況



本文編號：3278172