目的:探討異丙酚預(yù)處理是否能通過抑制NLRP3/caspase-1信號(hào)通路激活,進(jìn)而減輕腸缺血再灌注損傷。方法:選取48只雄性成年SD大鼠隨機(jī)分為三組:假手術(shù)組（Sham組）、缺血再灌注組（I/R組）和異丙酚組（P組）,每組16只,體重210-250g。使用無創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉腸系膜上動(dòng)脈90min,再灌注2h,建立腸I/R模型。P組在夾閉腸系膜上動(dòng)脈前30 min,經(jīng)腹腔注射異丙酚100mg/kg;Sham組和I/R組腹腔注射等體積脂肪乳（異丙酚的溶劑）。通過蘇木素-伊紅染色（hematoxylin and eosin,HE）觀察小腸粘膜的形態(tài)學(xué)變化,并進(jìn)行腸組織Chiu’s評(píng)分;采用蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）檢測NLRP3、caspase-1 p20、occludin、cleaved caspase-3、bax和bcl-2蛋白表達(dá)水平;通過免疫熒光（Immunofluorescence）染色觀察腸道NLRP3、caspase-1 p20蛋白的表達(dá)情況;采用原位末端標(biāo)記法（terminal dexynucleotidyl transferase-mediated dUTP n... 

【文章來源】：西南醫(yī)科大學(xué)四川省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

大鼠小腸缺血再灌注模型

西南醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文-27-圖3.WesternBlot檢測各組大鼠小腸組織蛋白表達(dá)情況。與Sham組比較，**P＜0.01；與I/R組比較，##P＜0.01。Figure3.Theproteinexpressioninsmallintestinaltissuesofratsineachgroup.Datawereexpressedasmean±SD.**P＜0.01vs.Shamgroup,##P＜0.01vs.I/Rgroup.4免疫熒光檢測大鼠小腸相關(guān)蛋白表達(dá)為了進(jìn)一步驗(yàn)證異丙酚能否通過抑制腸道NLRP3/caspase-1信號(hào)通路激活，從而減輕腸I/R所致的腸損傷，我們運(yùn)用免疫熒光技術(shù)對(duì)小腸組織的冰凍切片進(jìn)行了熒光染色，檢測腸道NLRP3和caspase-1p20的蛋白表達(dá)情況。如圖4可見，免疫熒光結(jié)果進(jìn)一步提示，與Sham組比較，I/R組腸道NLRP3和caspase-1p20的表達(dá)明顯增強(qiáng)，平均熒光強(qiáng)度顯著提高（P＜0.01）。與I/R組比較，P組的NLRP3和caspase-1p20的表達(dá)明顯減弱，平均熒光強(qiáng)度顯著下降（P＜0.01）。與Sham組比較，P組NLRP3和caspase-1p20的表達(dá)有所增強(qiáng)，平均熒光強(qiáng)度有所提高（P＜0.01）。

西南醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文-28-圖4.A和B分別表示大鼠腸缺血再灌注后小腸組織NLRP3和caspase-1p20（綠色）的免疫熒光染色（×200）。C和D分別表示NLRP3和caspase-1p20的平均熒光強(qiáng)度。與Sham組比較，**P＜0.01；與I/R組比較，##P＜0.01。Figure4.AshowedtheimmunofluorescencestainingofNLRP3(green)insmallintestinaltissuesofratsafterischemia-reperfusionandBshowedtheimmunofluorescencestainingofcaspase-1p20(green).CandDrespectivelyrepresentedtheaverageintensityoffluorescenceofNLRP3andcaspase-1p20.Magnification:×200.Scalebar=50um.Datawereexpressedasmean±SD.**P＜0.01vs.Shamgroup,##P＜0.01vs.I/Rgroup.5TUNEL檢測大鼠腸道細(xì)胞凋亡情況為了了解各組大鼠腸I/R后腸道細(xì)胞凋亡情況，我們運(yùn)用TUNEL檢測了小腸粘膜上皮，用藍(lán)色熒光標(biāo)記細(xì)胞核，用紅色熒光標(biāo)記腸道

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]缺血再灌注條件下BMP2/4參與腸黏膜屏障損傷的研究[J]. 陳康,陳應(yīng)果,王洪波,張朝軍,羅彬予,李科.  局解手術(shù)學(xué)雜志. 2019(02)
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本文編號(hào)：3233354