PI3Ks-AKT信號(hào)通路在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中有極為重要的功能,在眾多腫瘤中都保持較高的激活狀態(tài)。PI3Ks是一種可將PIP2催化為PIP3的酶,PIP3再招募PDK1和PDK2對(duì)AKT進(jìn)行磷酸化。PI3Ks信號(hào)參與細(xì)胞增殖,凋亡和分化等眾多細(xì)胞功能,與腫瘤的產(chǎn)生和惡化密切相關(guān)。而腫瘤發(fā)生的過程中,PI3Ks-AKT途徑經(jīng)常會(huì)發(fā)生異常調(diào)節(jié)進(jìn)而異常調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝,增殖以及凋亡等功能。PIK3CA是I型PI3Ks的一個(gè)重要的催化亞基,具有五個(gè)域:Adaptor-binding domain（ABD）,Ras-binding domain（RBD）,C2 domain,螺旋結(jié)構(gòu)域（he1ica1）,激酶結(jié)構(gòu)域（Kinase）。當(dāng)PIK3CA基因在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)出錯(cuò)時(shí),會(huì)導(dǎo)致Akt的活化發(fā)生異常,從而導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生錯(cuò)誤的行為。但是,目前有關(guān)于PIK3CA如何影響肺癌的發(fā)展以及PIK3CA的降解方式的研究還并不深入。我們首先在H1299和H1792中轉(zhuǎn)染RNF19B的質(zhì)粒,發(fā)現(xiàn)RNF19B能夠在肺癌細(xì)胞中下調(diào)PIK3CA的蛋白水平,并且是在轉(zhuǎn)染14 h后發(fā)現(xiàn)PIK3CA開始降解。之后我們用E64D和M... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２?ＣｌａｓｓＩＰＤＫ的作用??２．１．２?ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ?ｐａｔｈｗａｙ??ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信號(hào)通路可以減小細(xì)胞凋亡的可能性，促進(jìn)其存活和生長

ｎ??Ｃｌａｓｓ?ＩＩ?ＰＩ３Ｋｓ?Ｃｌａｓｓ?ＩＩＩ?ＰＩ３Ｋ?ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ??ＰＩ３ＫＣ２ｃｉ．Ｐ．ｔ?Ｃｌａｓｓ?ＩＩＩ?ＰＩＩ３Ｋ?（Ｖｐｓ３４＞?十?ｐｉ５０（Ｖｐｓ１５）??Ｃｌａｓｓ?ＩＩＩ?ＰＩＩ３Ｋ?＋?ｐｌ５０?＋?ｂｅｄｉｎ??Ｃｌａｓｓ?ＨＩ?Ｐ丨丨３Ｋ?＋?ｐ１５０?＋?ｂｅｄｉｎ?＋?ＵＶＲＡＧ??Ｃｌａｓｓ?ＩＩＩ?ＰＩＩ３Ｋ?＋?ｐ１５０?＋?ｂｅｄｉｎ?＋?ＡＴＧ１４??ＰＩ（３．４）Ｐ，?ＰＩ３Ｐ??，ｎ５ＰＰ４ＡＢ?ＭＴＭｓ??圖４?Ｃｌａｓｓ?ＩＩ／ＩＩＩ?ＰＩ３Ｋｓ的組成成分及其分子機(jī)制（改編自ｈａｗｋｉｎｓ，?Ｐ．Ｔ，?ｅｔ?ａｌ．，２０１５?）??２．３?Ｃｌａｓｓ?ＩＩＩ?ＰＩ３Ｋｓ??ＩＩＩ型ＰＩ３Ｋｓ是最早發(fā)現(xiàn)的一種ＰＩ３Ｋｓ，而且是酵母、植物以及后生動(dòng)物里唯??一的ＰＩ３Ｋｓ?（Ｖｐｓ３４），ＩＩＩ型ＰＩ３Ｋｓ催化磷脂酰肌醇（ＰＩ）磷酸化生成ＰＩ３Ｐ?（圖４）。??現(xiàn)在己知，ＰＩ３Ｐ是磷脂肌醇中最豐富的，通過與不同的效應(yīng)因子的ｄｏｍａｉｎ?（ＰＸ??或ＦＹＶＥ?ｄｏｍａｉｎ）結(jié)合來調(diào)節(jié)這些分子的命運(yùn)和功能［７９］。在細(xì)胞經(jīng)過活化后，??細(xì)胞內(nèi)的ＰＩ３Ｐ的總水平并不會(huì)發(fā)生明顯變化。然而，在自噬前體形成的早期、??發(fā)生內(nèi)吞作用和吞噬作用期間，細(xì)胞局部的ＰＩ３Ｐ產(chǎn)量會(huì)顯著增加。目前發(fā)現(xiàn)，??只有一個(gè)ＩＩＩ型ＰＩ３Ｋ催化亞基：Ｖｐｓ３４與細(xì)胞吞噬和自噬有關(guān)＿。在酵母中，??Ｖｐｓ３４作為兩種不同復(fù)合物的一部分存在，另外兩種組分是Ｖｐｓｌ５和Ｖｐｓ３０??（Ａｔｇ６）。Ｖｐｓｌ５可調(diào)節(jié)Ｖｐｓ３４的活性，并且同時(shí)活化Ｖｐｓ３４。Ｉ型Ｖｐｓ３４復(fù)合體??還有一種成分

?ＤＲ／Ｆａｓ?＼ｆＳＳＵ?Ｅｘｔｒｉｎｓｉｃ??１?Ｍｌ?ＴＮＦ＇Ｒ１??Ｉ?ＵＪ??贈(zèng)?＿?Ｂｎ?ＴＲＡＤＤ??ｍｓ?ｎｒ?Ｘ?ＴＲＡＦ２??ＭｔｏｃｈｏｎＵｎａ?—Ｓ，ｄ?ｌ＂ｌ＿ｌ??．１?、?＼?Ｉ?１?Ｉ?綱??＾?＼＼／?八ｌ??。０〇０。視‘?Ｍ?＾?＊Ｔ＂?Ｌ?＼??Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ?Ｃ?■■■；?ｉ?．［?Ｃａｓｐａｓｅ－８?ｂ?ＴＲＡＤＤ?ｊ??—＾?ｈ??４ｐ＿賣?Ｃａｓｐａｓｅ－３／７?Ａ／Ｈ）ｐｔ０ＳＩＳ??圖５細(xì)胞凋亡通路簡圖（改編自Ａｌｍａｇｒｏ?Ｍ?ｅｔ?ａｌ．２０１２）??內(nèi)源途徑又被稱為線粒體途徑，外因大多數(shù)為一些環(huán)境因素，比如化學(xué)藥物??和紫外線等，內(nèi)因主要是因?yàn)榧?xì)胞內(nèi)缺少營養(yǎng)物質(zhì)以及一些細(xì)胞生活所必需的物??質(zhì)所引發(fā)的［９１］。該途徑是由于線粒體內(nèi)膜和外膜兩側(cè)的Ｂｃｌ－２家族蛋白檢測到細(xì)??胞內(nèi)信號(hào)，打開線粒體膜的可滲透過渡孔，將呼吸鏈中的細(xì)胞色素Ｃ釋放。當(dāng)??然在此過程中也釋放了其他分子，例如某些核酸內(nèi)切酶等。細(xì)胞色素Ｃ與ｄＡＴＰ??結(jié)合到Ａｐａｒｆ－１上，引起后者發(fā)生多聚化，然后這個(gè)復(fù)合體與腺嘌呤核苷酸形成??了凋亡復(fù)合體。凋亡復(fù)合體募集并激活ＣａｓＰａＳｅ９，引發(fā)下游級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞??凋亡［＿。??４?Ｅ３?泛素?Ｕｇａｓｅ??泛素蛋白酶體系統(tǒng)（ＵＰＳ）包含六個(gè)組件：ＵＢ、蛋白酶體、ＤＵＢｓ、Ｅｌ激活??酶、Ｅ２結(jié)合酶、Ｅ３?１ｉｇａｓｅ，在細(xì)胞中負(fù)責(zé)蛋白質(zhì)的降解、ＤＮＡ修復(fù)、基因轉(zhuǎn)錄??的調(diào)節(jié)等［９５］。溶酶體和蛋白酶體是細(xì)胞降解蛋白質(zhì)的場所。溶酶體途徑大約降??解細(xì)胞中的１０％－２０％的蛋白質(zhì)，主要是一些膜錨定蛋白以


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