發(fā)布時(shí)間：2017-04-23 09:00

  本文關(guān)鍵詞：Fucoidan下調(diào)HIF-1α表達(dá)抑制淋巴管新生與Hca-F細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:低氧是腫瘤微環(huán)境的重要特征之一。在低氧環(huán)境中,低氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)促進(jìn)腫瘤發(fā)展與演進(jìn)。HIF-1α的合成與穩(wěn)定性受氧濃度調(diào)控。在腫瘤內(nèi)部呈現(xiàn)低氧的條件下,HIF-1α的兩個(gè)脯氨酸殘基被氧依賴的脯氨酸羥化酶羥基化的活性受到抑制,α亞基能穩(wěn)定存在細(xì)胞胞漿中,泛素化降解途徑受阻,并與核轉(zhuǎn)錄因子蛋白家族NF-κB協(xié)同作用,將α亞基轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核內(nèi),與結(jié)構(gòu)性亞基HIF-1β形成穩(wěn)定并且具有調(diào)控轉(zhuǎn)錄功能的二聚體,結(jié)合到特異的核苷酸序列,即缺氧反應(yīng)元件(hypoxia responsive element,HRE)從而形成復(fù)合體,激活下游相關(guān)40多種基因的表達(dá),調(diào)控血管、淋巴管的生成,能量的攝入,細(xì)胞的存活、增殖和侵襲轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為,因此,靶向抗HIF-1α的蛋白合成,核轉(zhuǎn)位及穩(wěn)定性的藥物研究,具有潛力,對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移,易復(fù)發(fā)的治療具有重大意義。腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康的殺手之一,其中,肝癌因預(yù)后易復(fù)發(fā),易轉(zhuǎn)移等特征成為致死率第三的癌癥。褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan),主要存在于褐藻體內(nèi),是一種富含硫酸酯的水溶性硫酸化雜聚糖。由于海洋生物資源豐富,富含具有藥用價(jià)值活性物質(zhì),開發(fā)海洋藥物已經(jīng)成為當(dāng)今研究的熱點(diǎn),其中多糖類物質(zhì)具有多種生物活性,并且毒副作用小,因此,對(duì)fucoidan的生物活性研究更具潛力。本實(shí)驗(yàn)以具有淋巴道高轉(zhuǎn)移能力的小鼠肝癌Hca-F細(xì)胞為模型,研究低氧環(huán)境下抑制淋巴道轉(zhuǎn)移的功能及機(jī)制研究是理想細(xì)胞株。但是,近年來fucoidan對(duì)低氧環(huán)境下,對(duì)肝癌細(xì)胞的淋巴道轉(zhuǎn)移與腫瘤細(xì)胞內(nèi)部淋巴管新生能力的影響少見文獻(xiàn)報(bào)道。方法:1.本文以氯化鈷(Carbonyl chloride,CoCl2)模擬實(shí)體腫瘤低氧微環(huán)境。本實(shí)驗(yàn)設(shè)常氧,低氧,低氧加fucoidan組(100-400 g/ml fucoidan),采用MTT法檢測構(gòu)建低氧環(huán)境的Co Cl2作用Hca-F細(xì)胞的最適時(shí)間及作用藥物濃度。2.探究低氧條件下,fucoidan對(duì)小鼠肝癌Hca-F細(xì)胞生長、HIF-1α表達(dá)、淋巴管新生及侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響以及fucoidan的干預(yù)作用。首先,采用CCK-8法,研究fucoidan在低氧環(huán)境下對(duì)Hca-F細(xì)胞活力的抑制作用。其次,采用western bloting、q RT-PCR及IFA法,研究fucoidan對(duì)Hca-F細(xì)胞中HIF-1α的表達(dá)及轉(zhuǎn)位的抑制作用,及其調(diào)控的下游基因,包括促進(jìn)淋巴管新生的生長因子VEGF-C和肝細(xì)胞生長因子HGF及其受體VEGFR-3和C-Met的表達(dá)的影響。最后,采用Transwell實(shí)驗(yàn),探究fucoidan對(duì)低氧誘導(dǎo)Hca-F細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響,以及促進(jìn)腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移ECM降解相關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9和抑制劑TIMP-1的表達(dá)。3.探究低氧條件下,fucoidan抑制小鼠肝癌Hca-F細(xì)胞HIF-1α表達(dá)相關(guān)信號(hào)通路關(guān)鍵作用因子的表達(dá)的影響。采用western bloting、qRT-PCR及IFA實(shí)驗(yàn),研究具有高淋巴道轉(zhuǎn)移潛力的Hca-F細(xì)胞中HIF-1α合成的PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路的表達(dá)及fucoidan的干預(yù)作用。結(jié)果:1.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:Co Cl2(100 mol/L)作用于Hca-F細(xì)胞24h,顯著上調(diào)HIF-1α蛋白和mRNA的表達(dá)(P0.01),因此成功建立體外低氧微環(huán)境。2.Fucoidan在低氧環(huán)境下作用于Hca-F細(xì)胞24h,可以下調(diào)NF-κB、MMP-2、MMP-9的表達(dá),上調(diào)TIMP-1的表達(dá),同時(shí),細(xì)胞遷移和侵襲能力亦下降。并且fucoidan作用于Hca-F細(xì)胞,下調(diào)VEGF-C和HGF的表達(dá)。同時(shí),小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn),通過免疫組化結(jié)果顯示:腫瘤內(nèi)部淋巴內(nèi)皮細(xì)胞成管結(jié)構(gòu)不完全,能力下降,小鼠體內(nèi)腫瘤淋巴管數(shù)顯著減少,存在結(jié)構(gòu)缺陷等現(xiàn)象。小鼠內(nèi)皮淋巴細(xì)胞mLEC體外成管實(shí)驗(yàn),在低氧條件下,mLEC細(xì)胞成管能力增強(qiáng),成管數(shù)量明顯增多,在fucoidan的干預(yù)作用下,mLEC細(xì)胞成管能力降低,數(shù)量相對(duì)低氧對(duì)照組,明顯減少。3.高淋巴道轉(zhuǎn)移潛力的Hca-F細(xì)胞中HIF-1α合成的PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路中,功能活性的p-PI3K/p-AKT/p-mTOR在低氧環(huán)境下的相對(duì)表達(dá)量比常氧環(huán)境下明顯升高,效果顯著,在fucoidan的干預(yù)作用下,p-PI3K/p-AKT/p-mTOR信號(hào)通路鈍化。結(jié)論:在低氧環(huán)境下,fucoidan顯著抑制小鼠肝癌Hca-F細(xì)胞侵襲,淋巴管新生和淋巴道轉(zhuǎn)移的潛能,可能與NF-κB和HIF-1α的表達(dá)下調(diào),鈍化PI3K/AKT/mTOR和ERK信號(hào)通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：Fucoidan 淋巴管新生 HIF-1α 低氧 轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R73-37
【目錄】：

• 中文摘要9-11
• 英文摘要11-14
• 第一部分 低氧對(duì)小鼠肝癌Hca-F細(xì)胞活力、HIF-1α 表達(dá)的影響及fucoidan干預(yù)的作用研究14-35
• 前言14-15
• 材料和方法15-25
• 1. 材料15-17
• 1.1 細(xì)胞系及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物15
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器及器材15
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑與藥品15-16
• 1.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑的配置16-17
• 2. 方法17-24
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)17
• 2.2 低氧模型的建立17-18
• 2.3 CCK-8 法檢測細(xì)胞活力18
• 2.4 Trypan blue檢測細(xì)胞毒作用18
• 2.5 AnnexinⅤ FITC 流式雙染檢測細(xì)胞凋亡18
• 2.6 細(xì)胞核蛋白提取及定量18-19
• 2.7 WB檢測蛋白表達(dá)19
• 2.8 免疫熒光檢測蛋白表達(dá)19
• 2.9 酶聯(lián)免疫吸附( Elisa)檢測細(xì)胞分泌蛋白的表達(dá)19-20
• 2.10 核酸mRNA提取及定量20-21
• 2.11 反轉(zhuǎn)錄21-22
• 2.12 SYBR Green 染料法 q RT-PCR 步驟22
• 2.13 定量 PCR 步驟22-24
• 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析24-25
• 結(jié)果25-31
• 1. 不同濃度 Co Cl2對(duì) Hca-F 細(xì)胞生長的影響25
• 2. Fucoidan 對(duì)低氧條件下小鼠肝癌 Hca-F 細(xì)胞活力的影響25-26
• 3．Fucoidan對(duì)低氧條件下小鼠肝癌Hca-F細(xì)胞凋亡的影響26-27
• 4．Fucoidan 對(duì) Co Cl2誘導(dǎo)的 Hca-F 細(xì)胞 HIF-1α 表達(dá)及轉(zhuǎn)位的影響27-28
• 5．Fucoidan 對(duì)低氧誘導(dǎo)環(huán)境下 Hca-F 細(xì)胞 HGF 和 VEHG-C 表達(dá)的影響28-29
• 6．Fucoidan 對(duì)低氧誘導(dǎo)環(huán)境下 Hca-F 細(xì)胞 C-Met 和 VEHGR-3 表達(dá)的影響29-31
• 討論31-33
• 參考文獻(xiàn)33-35
• 第二部分 Fucoidan對(duì)低氧Hca-F細(xì)胞淋巴管新生及轉(zhuǎn)移及侵襲能力的影響35-51
• 前言35-36
• 材料和方法36-40
• 1.材料36
• 1.1 細(xì)胞系及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物36
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器及器材36
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑與藥品36
• 2.方法36-39
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)36
• 2.2 建立小鼠體內(nèi)腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型及藥物處理36-37
• 2.3 HE染色37
• 2.4 免疫組織化學(xué)染色步驟37
• 2.5 小鼠mLECs體外成管實(shí)驗(yàn)37
• 2.6 小鼠體外Transwell小室細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)37-38
• 2.7 Western Blotting實(shí)驗(yàn)38
• 2.8 免疫組織熒光實(shí)驗(yàn)38-39
• 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理39-40
• 結(jié)果40-45
• 1.Fucoidan對(duì)小鼠體內(nèi)腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移能力的影響40-41
• 2.Fucoidan對(duì)小鼠體內(nèi)腫瘤淋巴管新生的影響41-42
• 3.Fucoidan對(duì)mLEC成管能力的影響42
• 4. Fucoidan對(duì)小鼠體外轉(zhuǎn)移及侵襲能力的影響42-43
• 5. Fucoidan抑制低氧誘導(dǎo)的Hca-F細(xì)胞中HIF-1α 表達(dá)的相關(guān)信號(hào)通路的影響43-45
• 討論45-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 綜述51-65
• 參考文獻(xiàn)60-65
• 創(chuàng)新點(diǎn)65-66
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況66-67
• 致謝67-68

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊之;顧浩平;張海明;蘇明遠(yuǎn);秦芳;劉學(xué)良;;吸煙對(duì)高原人適應(yīng)低氧環(huán)境能力的影響[J];心肺血管學(xué)報(bào);1986年01期

2 ;間斷緩慢暴露于低氧環(huán)境對(duì)小鼠飼養(yǎng)行為的影響[J];高原醫(yī)學(xué)雜志;1994年04期

3 高紅,周晶萍,王象勇,李子安;高海拔低氧環(huán)境人血清酶與平原水平比較分析[J];臨床薈萃;2004年06期

4 陳麗;高海拔低氧環(huán)境下銀行職工心電圖調(diào)查分析[J];職業(yè)與健康;2001年03期

5 敖強(qiáng)國;宋世濤;鄒慧;;高原低壓低氧環(huán)境對(duì)平原健康男青年血像和腎功能影響[J];中華保健醫(yī)學(xué)雜志;2011年06期

6 張海紅;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞受低氧環(huán)境的影響探討[J];亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥;2012年10期

7 丁盛;低氧環(huán)境神經(jīng)衰弱的治療體會(huì)[J];西藏醫(yī)藥雜志;1991年03期

8 謝新民;文亞蘭;;長期低氧環(huán)境暴露對(duì)認(rèn)知功能影響[J];中國公共衛(wèi)生;2008年07期

9 劉娟;羅二平;吳小明;謝康寧;湯池;李娜;閆一力;申廣浩;;便攜式富氧機(jī)在模擬低氧環(huán)境中對(duì)機(jī)體血?dú)獾挠绊慬J];中國醫(yī)學(xué)物理學(xué)雜志;2012年02期

10 石永杰;申廣浩;謝康寧;孫濤;劉娟;羅二平;;模擬低氧環(huán)境中彌散富氧對(duì)大鼠行為學(xué)指標(biāo)的影響[J];中國醫(yī)學(xué)物理學(xué)雜志;2013年01期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 李國建;朱能;;高溫高濕低氧環(huán)境對(duì)人情緒的影響研究[A];全國暖通空調(diào)制冷2008年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2008年

2 劉曉林;朱能;李國建;孫麗婧;;對(duì)高溫高濕低氧環(huán)境的初步研究[A];全國暖通空調(diào)制冷2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

3 朱衛(wèi)中;董建文;丁海雷;周兆年;;生長發(fā)育在間歇性低氧環(huán)境能增加大鼠心肌抗缺血能力[A];中國生理學(xué)會(huì)第六屆應(yīng)用生理學(xué)委員會(huì)全國學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

4 郭晶;孫芳云;王守寶;張敏;朱敏俠;宮麗麗;戎浩;劉曉利;袁東亞;劉青;尼瑪次仁;方蓮花;杜冠華;;高原低壓低氧環(huán)境對(duì)大鼠血管反應(yīng)性的影響[A];中國藥理學(xué)會(huì)第十次全國學(xué)術(shù)會(huì)議專刊[C];2009年

5 于海源;劉趙淼;馬重芳;;高溫低氧環(huán)境下逆向式燃燒與同向式燃燒的比較分析[A];北京力學(xué)會(huì)第11屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2005年

6 張卉杰;吳昊;黎健冰;;呼吸肌訓(xùn)練對(duì)低氧環(huán)境下呼吸肌群疲勞的表面肌電研究[A];2011年中國生理學(xué)會(huì)運(yùn)動(dòng)生理學(xué)專業(yè)委員會(huì)會(huì)議暨“運(yùn)動(dòng)與骨骼肌”學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

7 張寬;朱玲玲;范明;;間歇性低氧環(huán)境對(duì)幼年小鼠神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響[A];Proceedings of the 8th Biennial Conference of the Chinese Society for Neuroscience[C];2009年

8 陳濤;孫茂;黎春;田文宇;孫建勇;王祥云;劉春立;;低氧環(huán)境對(duì)~(125)I在甘肅北山深部花崗巖中擴(kuò)散行為的影響[A];中國化學(xué)會(huì)第26屆學(xué)術(shù)年會(huì)現(xiàn)代核化學(xué)與放射化學(xué)分會(huì)場論文集[C];2008年

9 趙善民;晉玲;黃麗娟;何顯教;黃俊杰;梁祚仁;黃彥峰;;心肌缺血在低溫低氧環(huán)境下的心電圖變化分析[A];中南地區(qū)第六屆生理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2004年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 胡德榮;低氧環(huán)境誘導(dǎo)急粒白血病細(xì)胞系分化[N];健康報(bào);2006年

2 蔡申夫;青藏鐵路：高海拔的考驗(yàn)[N];科技日?qǐng)?bào);2003年

3 安琪;沉著應(yīng)對(duì)高原反應(yīng)[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2003年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 王海濤;低氧環(huán)境模擬醫(yī)學(xué)研究平臺(tái)建立與應(yīng)用研究[D];山東大學(xué);2011年

2 李國建;高溫高濕低氧環(huán)境下人體熱耐受性研究[D];天津大學(xué);2008年

3 沈凌;黃芪對(duì)低氧環(huán)境下血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子/基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化、遷移的干預(yù)作用的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2010年

4 涂生芬;低氧環(huán)境下丙泊酚對(duì)新生大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響及其機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 王先;低氧環(huán)境對(duì)肥胖男青年最大脂代謝水平的影響[D];河北師范大學(xué);2015年

2 滕洪明;Fucoidan下調(diào)HIF-1α表達(dá)抑制淋巴管新生與Hca-F細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響及機(jī)制研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

3 藺瑞;低氧環(huán)境監(jiān)測與控制系統(tǒng)的改進(jìn)[D];河北工業(yè)大學(xué);2006年

4 劉曉林;高溫高濕低氧環(huán)境中影響人體耐力的若干因素實(shí)驗(yàn)研究[D];天津大學(xué);2007年

5 張卉杰;呼吸肌群訓(xùn)練對(duì)低氧環(huán)境適應(yīng)特點(diǎn)的研究[D];首都體育學(xué)院;2012年

6 廖新根;BMP-2誘導(dǎo)低氧環(huán)境下BMSCs向軟骨表型分化[D];南昌大學(xué);2012年

7 石海霞;脫離低壓低氧環(huán)境對(duì)大鼠低氧性肺血管重建的影響及氟西汀的干預(yù)作用[D];青海大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：Fucoidan下調(diào)HIF-1α表達(dá)抑制淋巴管新生與Hca-F細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：322108