研究背景和目的研究發(fā)現(xiàn)2型糖尿病與胰島素抵抗患者在空腹時血漿中支鏈氨基酸（branched-chain amino acid,BCAA）濃度增加,但其機制并不完全清楚。肝臟是BCAA轉(zhuǎn)運及代謝的重點場所之一,血漿氨基酸進出肝細胞必然要靠氨基酸轉(zhuǎn)運蛋白的協(xié)調(diào),因此肝臟氨基酸轉(zhuǎn)運蛋白很可能存在改變。另外,肥胖會導致機體出現(xiàn)慢性炎癥反應并激活核因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）。我們既往的研究顯示高脂膳食肥胖型胰島素抵抗大鼠中血漿BCAA水平增加,而通過NF-κB信號通路抑制劑吡咯烷二硫代甲酸鹽（pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）干預會降低增加的BCAA水平。進一步了解高脂環(huán)境下肝細胞氨基酸轉(zhuǎn)運蛋白及氨基酸代謝情況,對研究空腹血漿支鏈氨基酸含量升高原由具有重要意義。本研究擬探究高脂環(huán)境下結(jié)合使用炎癥抑制劑PDTC是否對肝細胞氨基酸轉(zhuǎn)運蛋白的表達和細胞內(nèi)氨基酸代謝有影響。材料與方法取大鼠肝細胞株BRL-3A進行細胞培養(yǎng),分化后細胞血清饑餓4h后置于MEM培養(yǎng)基,具體分組如下:1.常規(guī)MEM（含5mmol/L葡萄糖,0.1mM軟脂酸）,進一... 

【文章來源】：廣州體育學院廣東省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 引言
2 文獻綜述
    2.1 2型糖尿病與肥胖的聯(lián)系
    2.2 2型糖尿病與支鏈氨基酸的聯(lián)系
    2.3 支鏈氨基酸的氧化代謝
    2.4 支鏈氨基酸相關轉(zhuǎn)運蛋白系統(tǒng)
        2.4.1 谷氨酰胺
        2.4.2 氨基酸轉(zhuǎn)運蛋白SLC38家族
    2.5 2型糖尿病與NF-κB信號通路
3 研究材料與方法
    3.1 研究對象
    3.2 主要實驗儀器與耗材
        3.2.1 主要儀器與設備
        3.2.2 主要試劑和耗材
    3.3 實驗技術路線
    3.4 肝細胞株BRL-3A的培養(yǎng)
        3.4.1 試劑配置
        3.4.2 肝細胞分化
    3.5 研究方案
    3.6 熒光定量PCR(Polymerase Chain Reaction)
        3.6.1 細胞總RNA提取
        3.6.2 RNA濃度及純度測試
        3.6.3 逆轉(zhuǎn)錄反應
        3.6.4 引物擴增
        3.6.5 熒光定量PCR
        3.6.6 PCR的結(jié)果數(shù)據(jù)處理
    3.7 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot,WB)
        3.7.1 試劑配制
        3.7.2 細胞蛋白的提取及定量
        3.7.3 WB上樣樣品準備
        3.7.4 SDS-PAGE電泳
        3.7.5 濕式電轉(zhuǎn)膜
        3.7.6 免疫反應
        3.7.7 統(tǒng)計學數(shù)據(jù)處理
4 實驗結(jié)果
    4.1 PDTC對高脂環(huán)境下肝細胞炎癥信號影響
    4.2 PDTC對高脂環(huán)境肝細胞BCAA相關轉(zhuǎn)運蛋白基因和蛋白表達結(jié)果
    4.3 PDTC對高脂環(huán)境肝細胞BCAA分解代謝相關酶的基因表達
5 討論
    5.1 高脂環(huán)境下氨基酸轉(zhuǎn)運蛋白對血漿BCAA的影響
    5.2 高脂環(huán)境下氨基酸代謝酶對血漿BCAA的影響
    5.3 PDTC對高脂環(huán)境下氨基酸轉(zhuǎn)運蛋白及氨基酸代謝影響
6 結(jié)論
7 致謝
8 參考文獻
9 個人簡歷 在讀期間發(fā)表的學術論文與研究成果



本文編號：3170714