本文關(guān)鍵詞：α-螺旋抗癌肽L-K6對人乳腺癌MCF-7細胞的內(nèi)化機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：L-K6是中國林蛙皮膚抗菌肽Temporin-1CEb的改造肽。本實驗室前期研究表明,L-K6對多種乳腺癌細胞的增殖有顯著的抑制作用�？缒る娢粰z測顯示L-K6對乳腺癌MCF-7的細胞膜無明顯的去極化作用,對細胞膜通透性影響較小并且對細胞膜沒有明顯的破壞作用。這些結(jié)果提示L-K6對乳腺癌MCF-7細胞的作用靶點可能是胞內(nèi)物質(zhì)而非細胞膜。本論文初步探究L-K6進入細胞膜方式及作用機制。首先,我們利用激光共聚焦顯微鏡和超高分辨率顯微鏡研究L-K6對乳腺癌MCF-7細胞的細胞膜、細胞骨架、細胞核形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響,結(jié)果顯示L-K6作用1小時,MCF-7細胞膜基本保持完整,細胞骨架形態(tài)清晰,但是細胞核熒光減弱,并隨L-K6濃度增大核熒光減弱程度增加。說明L-K6以某種方式進入細胞后,作用于細胞核。其次,我們利用流式細胞儀、熒光酶標(biāo)儀、超高分辨率顯微鏡研究L-K6的入膜方式。檢測結(jié)果顯示,用內(nèi)吞抑制劑甲基-β-環(huán)糊精(M-β-CD)、阿米洛利(EIPA)、氯丙嗪(CPZ)、細胞松弛素D(CyD)處理細胞后,FITC-L-K6的內(nèi)化量均有不同程度的減少,證明L-K6主要以內(nèi)吞的方式進入MCF-7細胞,其中細胞松弛素D(CyD)對L-K6內(nèi)化量的影響最為顯著。為探究L-K6內(nèi)化過程的能量依賴性,我們進行了低溫試驗,實驗結(jié)果顯示,在4oC低溫環(huán)境中L-K6的內(nèi)化量與37oC環(huán)境中L-K6的內(nèi)化量相比顯著降低,說明L-K6的內(nèi)化具有能量依賴性。L-K6是陽離子抗菌肽,其首先通過靜電作用與MCF-7細胞表面帶負電荷的磷脂酰絲氨酸(PS)結(jié)合,聚集在MCF-7細胞表面,達到內(nèi)吞作用的啟動。等溫滴定微量熱儀(ITC)實驗證明了L-K6與PS發(fā)生特異性結(jié)合,結(jié)合比接近1:1;CD色譜實驗也證明PS可以誘導(dǎo)L-K6形成α-螺旋結(jié)構(gòu),并隨著PS濃度增加,L-K6形成α-螺旋含量增加。而MCF-7細胞膜表面帶負電荷的HS、CS和神經(jīng)節(jié)苷脂不參與L-K6的內(nèi)化。
【關(guān)鍵詞】：抗癌肽 抗癌活性 內(nèi)吞作用 磷脂酰絲氨酸
【學(xué)位授予單位】：遼寧師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R73-36;Q51
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 引言8-9
• 1.文獻綜述9-16
• 1.1 抗菌肽的研究概況9-10
• 1.1.1 抗菌肽來源9
• 1.1.2 抗菌肽的分類9-10
• 1.1.3 抗菌肽的生物活性10
• 1.1.4 抗癌肽10
• 1.2 抗癌肽的作用機制10-15
• 1.2.1 抗癌肽的抗癌活性作用機制10-13
• 1.2.2 抗癌肽的內(nèi)化機制及影響因素13-15
• 1.3 抗癌肽的應(yīng)用前景15-16
• 2.L-K6對細胞結(jié)構(gòu)的影響16-21
• 2.1 材料16
• 2.1.1 實驗材料16
• 2.1.2 分析工具16
• 2.2 實驗方法16-17
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)16
• 2.2.2 激光共聚焦顯微鏡觀察L-K6對細胞膜的影響16-17
• 2.2.3 超高分辨率顯微鏡觀察L-K6對細胞骨架和細胞核的影響17
• 2.3 實驗結(jié)果17-19
• 2.3.1 L-K6對細胞膜的影響17-18
• 2.3.2 L-K6對細胞骨架和細胞核的影響18-19
• 2.4 討論19-21
• 3.L-K6的內(nèi)化機制--內(nèi)吞作用方式的探究21-31
• 3.1 材料21
• 3.1.1 實驗材料21
• 3.1.2 分析工具21
• 3.2 實驗方法21-22
• 3.2.1MTT法檢測四種內(nèi)吞抑制劑對L-K6細胞毒的影響21
• 3.2.2 熒光酶標(biāo)儀和流式細胞儀檢測四種內(nèi)吞抑制劑對L-K6內(nèi)化的影響21-22
• 3.2.3 超高分辨顯微鏡檢測四種抑制劑對L-K6內(nèi)化影響22
• 3.2.4 低溫檢測L-K6的內(nèi)化與能量的關(guān)系22
• 3.3 實驗結(jié)果22-29
• 3.3.1 四種內(nèi)吞抑制劑對L-K6細胞毒的影響22-23
• 3.3.2 四種內(nèi)吞抑制劑對L-K6內(nèi)化的影響23-27
• 3.3.3 L-K6內(nèi)化的能量依賴性27-29
• 3.4 討論29-31
• 4.細胞表面負電荷成分對L-K6內(nèi)化的影響31-37
• 4.1 材料31
• 4.1.1 實驗材料31
• 4.1.2 分析儀器31
• 4.2 實驗方法31-32
• 4.2.1 ITC方法檢測PS與L-K6的結(jié)合31
• 4.2.2 圓二色譜檢測L-K6在不同的脂質(zhì)體環(huán)境中的二級結(jié)構(gòu)變化31
• 4.2.3 MTT檢測HS、CS、GM1對L-K6細胞毒的影響31-32
• 4.3 實驗結(jié)果32-34
• 4.3.1 磷脂酰絲氨酸（PS）與L-K6的結(jié)合32
• 4.3.2 L-K6在不同PS含量的脂質(zhì)體環(huán)境中二級結(jié)構(gòu)的變化32-34
• 4.3.3 HS、CS、GM1對L-K6細胞毒的影響34
• 4.4 討論34-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻38-41
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況41-42
• 致謝42

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1 徐效華;王昕;林長江;高煒;;抗癌肽Symplostatin的全合成[A];中國化學(xué)會第四屆有機化學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集（下冊）[C];2005年

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1 宮賢閣;α-螺旋抗癌肽L-K6對人乳腺癌MCF-7細胞的內(nèi)化機制研究[D];遼寧師范大學(xué);2015年

2 王紅葉;α-螺旋型多肽對不同腫瘤細胞的抗癌活性研究[D];吉林大學(xué);2010年

3 劉棟;陽離子抗癌肽HPRP-A1體外誘導(dǎo)癌細胞凋亡的實驗研究[D];吉林大學(xué);2014年

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本文編號：315684