本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇對(duì)人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞中GRP78、ATP5B和VEGF的表達(dá)影響及其潛在生物學(xué)意義分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景：髓母細(xì)胞瘤是兒童最常見(jiàn)的惡性腦腫瘤,好發(fā)于10歲以下的兒童,絕大多數(shù)生長(zhǎng)于第四腦室的小腦蚓部,依賴血管生成為組織提供氧氣和營(yíng)養(yǎng),腫瘤血管分布不均、雜亂無(wú)章、缺乏基底膜、通透性高,從而促進(jìn)了腫瘤浸潤(rùn)性生長(zhǎng),為腫瘤的播散轉(zhuǎn)移提供了途徑。目前以神經(jīng)外科顯微手術(shù)為主,放療、化療為輔的綜合治療手段日臻成熟,但要做到對(duì)顱內(nèi)高度浸潤(rùn)的腫瘤進(jìn)行根治性治療仍然十分困難。同時(shí)大劑量的放、化療均對(duì)患者有毒副作用,如小腦發(fā)育異常、骨髓抑制、肝功能異常和血象改變,且其毒性具有延遲性和積累性,因此探尋一種療效可靠且無(wú)毒副作用的抗血管生成藥物用來(lái)治療髓母細(xì)胞瘤具有重要的臨床意義。白藜蘆醇是一種廣泛存在于葡萄、花生、虎杖等70多種植物中的非黃酮類多酚化合物。它具有多種生物學(xué)活性,對(duì)機(jī)體無(wú)明顯毒副作用,其脂溶性強(qiáng),分子量小,極易通過(guò)血腦屏障,是一種頗具前景的腫瘤預(yù)防和治療藥物。有研究表明白藜蘆醇能夠通過(guò)多種途徑抑制腫瘤血管生成,進(jìn)而抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是一種公認(rèn)的血管生成過(guò)程中的關(guān)鍵因子,其在肺癌、乳腺癌、膠質(zhì)瘤、髓母細(xì)胞瘤等多種腫瘤中過(guò)表達(dá)且與腫瘤惡性程度密切相關(guān)。葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)也稱為免疫球蛋白重鏈結(jié)合蛋白,是一種定位于細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的分子伴侶,表達(dá)于肺癌、胃癌、前列腺癌等多種腫瘤中,參與腫瘤轉(zhuǎn)移和腫瘤血管生成。ATP5B基因主要編碼ATP合成酶p亞基,是一種廣泛分布于線粒體上的跨膜蛋白復(fù)合物,可異位分布于腫瘤細(xì)胞表面,參與血管生成的調(diào)節(jié)過(guò)程。目前,白藜蘆醇對(duì)人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞中GRP78和ATP5B的調(diào)節(jié)作用尚未見(jiàn)報(bào)道。目的：本研究旨在探討白藜蘆醇對(duì)不同敏感性髓母細(xì)胞瘤中GRP78、ATP5B和VEGF表達(dá)的影響及生物學(xué)意義。1)探討人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系UW228-3和DAOY在白藜蘆醇處理前后的反應(yīng)性差異；2)檢測(cè)上述兩個(gè)細(xì)胞系細(xì)胞中GRP78、ATP5B和VEGF在白藜蘆醇處理前后的表達(dá)改變；3)探討白藜蘆醇的抗血管生成的分子機(jī)制,分析白藜蘆醇抗髓母細(xì)胞瘤敏感性差異的分子基礎(chǔ),以期為揭示抗血管生成藥物作用靶點(diǎn)和髓母細(xì)胞瘤的個(gè)體化治療提供堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。方法：將人髓母細(xì)胞瘤UW228-3和DAOY細(xì)胞分別培養(yǎng)于含10%胎牛血清的低糖DMEM和1640培養(yǎng)液中；用100μM白藜蘆醇處理48h后收集細(xì)胞及細(xì)胞爬片,通過(guò)HE染色,MTT檢測(cè)和流式細(xì)胞儀技術(shù)觀察并檢測(cè)細(xì)胞系UW228-3和DAOY在白藜蘆醇處理前后的改變；應(yīng)用雙向凝膠電泳技術(shù)比較白藜蘆醇處理前后髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系UW228-3和DAOY中的蛋白質(zhì)表達(dá)情況,利用質(zhì)譜技術(shù)對(duì)差異蛋白進(jìn)行鑒定分析,篩選潛在的抗腫瘤血管生成藥物作用靶點(diǎn)；通過(guò)IHC檢測(cè)GRP78和ATP5B在人髓母細(xì)胞瘤組織陣列的表達(dá)情況并進(jìn)行相關(guān)性分析；利用RT-PCR、ICC和Western-blotting等方法檢測(cè)白藜蘆醇處理前后細(xì)胞系UW228-3和DAOY細(xì)胞中GRP78、ATP5B和VEGF的表達(dá)情況。結(jié)果：1)HE染色、MTT和流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,100gM白藜蘆醇處理48小時(shí)后,髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系UW228-3的細(xì)胞數(shù)目明顯減少且細(xì)胞形態(tài)發(fā)生顯著變化,而白藜蘆醇處理48小時(shí)前后細(xì)胞系DAOY的細(xì)胞數(shù)量與形態(tài)均未出現(xiàn)明顯變化；2)雙向凝膠電泳技術(shù)和質(zhì)譜鑒定研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),白藜蘆醇處理48h后細(xì)胞系DAOY中潛在的抗腫瘤血管生成藥物作用靶點(diǎn)GRP78呈2.1倍上調(diào),ATP5B呈3.0倍上調(diào)；3)IHC結(jié)果發(fā)現(xiàn),GRP78和ATP5B在瘤旁相對(duì)正常組織中的陽(yáng)性表達(dá)率較高,且與人髓母細(xì)胞瘤組織相比存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；4)RT-PCR、ICC和Western-blotting的結(jié)果表明,白藜蘆醇處理48h后細(xì)胞系UW228-3和DAOY中GRP78和ATP5B的表達(dá)均上調(diào),且變化趨勢(shì)相似,而血管生成因子VEGF的表達(dá)下調(diào),且在敏感性細(xì)胞UW228-3中下調(diào)更為顯著。結(jié)論：1)白藜蘆醇在人髓母細(xì)胞瘤兩種細(xì)胞系中存在抗腫瘤效應(yīng)差異,相對(duì)細(xì)胞系DAOY而言,UW228-3對(duì)一定濃度的白藜蘆醇反應(yīng)更為敏感；2)白藜蘆醇處理前后人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞中的蛋白表達(dá)圖譜存在差異；3)白藜蘆醇可以促進(jìn)髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞中GRP78和ATP5B的表達(dá),下調(diào)、EGF的表達(dá)；4)對(duì)白藜蘆醇敏感／欠敏感的細(xì)胞系中GRP78和ATP5B的表達(dá)變化趨勢(shì)相似,而VEGF則在敏感性細(xì)胞中下調(diào)更為顯著,可能為白藜蘆醇抗血管生成的重要靶點(diǎn)之一。白藜蘆醇處理后GRP78和ATP5B表達(dá)上調(diào)的細(xì)胞生物學(xué)意義有待進(jìn)一步分析。
【關(guān)鍵詞】：髓母細(xì)胞瘤 白藜蘆醇 GRP78 ATP5B VEGF
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 材料和方法14-26
• 結(jié)果26-38
• 討論38-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 綜述47-59
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 致謝59

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 徐慶福;李立超;朱瀟鵬;Jesse Chung-Sean Pang;符星;劉景平;呂勝青;;PAPST1 siRNA抑制髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系DAOY增殖活性的研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2014年09期

2 楊曉非;;Wortmannin對(duì)人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系Daoy增殖和凋亡的影響[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2012年11期

3 ;[J];;年期

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 周永紅;讓癌細(xì)胞無(wú)路可逃[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 王稼輝;白藜蘆醇對(duì)人膠質(zhì)瘤及髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞蛋白質(zhì)組調(diào)節(jié)作用的初探[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

2 韓旭;白藜蘆醇對(duì)人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞中GRP78、ATP5B和VEGF的表達(dá)影響及其潛在生物學(xué)意義分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

3 李嚴(yán);BNIP3在人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞中的表達(dá)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2010年

4 范少華;白藜蘆醇誘導(dǎo)髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞NF-κB活化的生物學(xué)意義分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2006年

5 王月圓;PARP-1缺失小鼠髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系的建立和功能分析[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

6 劉楠;Wnt信號(hào)通路狀態(tài)與白藜蘆醇抗髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞作用關(guān)系的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2007年

  本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇對(duì)人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞中GRP78、ATP5B和VEGF的表達(dá)影響及其潛在生物學(xué)意義分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：311203