本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇對人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞中GRP78、ATP5B和VEGF的表達(dá)影響及其潛在生物學(xué)意義分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景：髓母細(xì)胞瘤是兒童最常見的惡性腦腫瘤,好發(fā)于10歲以下的兒童,絕大多數(shù)生長于第四腦室的小腦蚓部,依賴血管生成為組織提供氧氣和營養(yǎng),腫瘤血管分布不均、雜亂無章、缺乏基底膜、通透性高,從而促進(jìn)了腫瘤浸潤性生長,為腫瘤的播散轉(zhuǎn)移提供了途徑。目前以神經(jīng)外科顯微手術(shù)為主,放療、化療為輔的綜合治療手段日臻成熟,但要做到對顱內(nèi)高度浸潤的腫瘤進(jìn)行根治性治療仍然十分困難。同時(shí)大劑量的放、化療均對患者有毒副作用,如小腦發(fā)育異常、骨髓抑制、肝功能異常和血象改變,且其毒性具有延遲性和積累性,因此探尋一種療效可靠且無毒副作用的抗血管生成藥物用來治療髓母細(xì)胞瘤具有重要的臨床意義。白藜蘆醇是一種廣泛存在于葡萄、花生、虎杖等70多種植物中的非黃酮類多酚化合物。它具有多種生物學(xué)活性,對機(jī)體無明顯毒副作用,其脂溶性強(qiáng),分子量小,極易通過血腦屏障,是一種頗具前景的腫瘤預(yù)防和治療藥物。有研究表明白藜蘆醇能夠通過多種途徑抑制腫瘤血管生成,進(jìn)而抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是一種公認(rèn)的血管生成過程中的關(guān)鍵因子,其在肺癌、乳腺癌、膠質(zhì)瘤、髓母細(xì)胞瘤等多種腫瘤中過表達(dá)且與腫瘤惡性程度密切相關(guān)。葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)也稱為免疫球蛋白重鏈結(jié)合蛋白,是一種定位于細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的分子伴侶,表達(dá)于肺癌、胃癌、前列腺癌等多種腫瘤中,參與腫瘤轉(zhuǎn)移和腫瘤血管生成。ATP5B基因主要編碼ATP合成酶p亞基,是一種廣泛分布于線粒體上的跨膜蛋白復(fù)合物,可異位分布于腫瘤細(xì)胞表面,參與血管生成的調(diào)節(jié)過程。目前,白藜蘆醇對人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞中GRP78和ATP5B的調(diào)節(jié)作用尚未見報(bào)道。目的：本研究旨在探討白藜蘆醇對不同敏感性髓母細(xì)胞瘤中GRP78、ATP5B和VEGF表達(dá)的影響及生物學(xué)意義。1)探討人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系UW228-3和DAOY在白藜蘆醇處理前后的反應(yīng)性差異；2)檢測上述兩個(gè)細(xì)胞系細(xì)胞中GRP78、ATP5B和VEGF在白藜蘆醇處理前后的表達(dá)改變；3)探討白藜蘆醇的抗血管生成的分子機(jī)制,分析白藜蘆醇抗髓母細(xì)胞瘤敏感性差異的分子基礎(chǔ),以期為揭示抗血管生成藥物作用靶點(diǎn)和髓母細(xì)胞瘤的個(gè)體化治療提供堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。方法：將人髓母細(xì)胞瘤UW228-3和DAOY細(xì)胞分別培養(yǎng)于含10%胎牛血清的低糖DMEM和1640培養(yǎng)液中；用100μM白藜蘆醇處理48h后收集細(xì)胞及細(xì)胞爬片,通過HE染色,MTT檢測和流式細(xì)胞儀技術(shù)觀察并檢測細(xì)胞系UW228-3和DAOY在白藜蘆醇處理前后的改變；應(yīng)用雙向凝膠電泳技術(shù)比較白藜蘆醇處理前后髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系UW228-3和DAOY中的蛋白質(zhì)表達(dá)情況,利用質(zhì)譜技術(shù)對差異蛋白進(jìn)行鑒定分析,篩選潛在的抗腫瘤血管生成藥物作用靶點(diǎn)；通過IHC檢測GRP78和ATP5B在人髓母細(xì)胞瘤組織陣列的表達(dá)情況并進(jìn)行相關(guān)性分析；利用RT-PCR、ICC和Western-blotting等方法檢測白藜蘆醇處理前后細(xì)胞系UW228-3和DAOY細(xì)胞中GRP78、ATP5B和VEGF的表達(dá)情況。結(jié)果：1)HE染色、MTT和流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示,100gM白藜蘆醇處理48小時(shí)后,髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系UW228-3的細(xì)胞數(shù)目明顯減少且細(xì)胞形態(tài)發(fā)生顯著變化,而白藜蘆醇處理48小時(shí)前后細(xì)胞系DAOY的細(xì)胞數(shù)量與形態(tài)均未出現(xiàn)明顯變化；2)雙向凝膠電泳技術(shù)和質(zhì)譜鑒定研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),白藜蘆醇處理48h后細(xì)胞系DAOY中潛在的抗腫瘤血管生成藥物作用靶點(diǎn)GRP78呈2.1倍上調(diào),ATP5B呈3.0倍上調(diào)；3)IHC結(jié)果發(fā)現(xiàn),GRP78和ATP5B在瘤旁相對正常組織中的陽性表達(dá)率較高,且與人髓母細(xì)胞瘤組織相比存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；4)RT-PCR、ICC和Western-blotting的結(jié)果表明,白藜蘆醇處理48h后細(xì)胞系UW228-3和DAOY中GRP78和ATP5B的表達(dá)均上調(diào),且變化趨勢相似,而血管生成因子VEGF的表達(dá)下調(diào),且在敏感性細(xì)胞UW228-3中下調(diào)更為顯著。結(jié)論：1)白藜蘆醇在人髓母細(xì)胞瘤兩種細(xì)胞系中存在抗腫瘤效應(yīng)差異,相對細(xì)胞系DAOY而言,UW228-3對一定濃度的白藜蘆醇反應(yīng)更為敏感；2)白藜蘆醇處理前后人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞中的蛋白表達(dá)圖譜存在差異；3)白藜蘆醇可以促進(jìn)髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞中GRP78和ATP5B的表達(dá),下調(diào)、EGF的表達(dá)；4)對白藜蘆醇敏感／欠敏感的細(xì)胞系中GRP78和ATP5B的表達(dá)變化趨勢相似,而VEGF則在敏感性細(xì)胞中下調(diào)更為顯著,可能為白藜蘆醇抗血管生成的重要靶點(diǎn)之一。白藜蘆醇處理后GRP78和ATP5B表達(dá)上調(diào)的細(xì)胞生物學(xué)意義有待進(jìn)一步分析。
【關(guān)鍵詞】：髓母細(xì)胞瘤 白藜蘆醇 GRP78 ATP5B VEGF
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R285
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 材料和方法14-26
• 結(jié)果26-38
• 討論38-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 綜述47-59
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 致謝59

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本文編號：311203