發(fā)布時間：2021-02-17 09:45

　　目的（1）通過BALB/c小鼠急性毒性實驗、一般藥理學(xué)實驗、基因表達蛋白分布實驗,Wistar大鼠長期毒性實驗,初步評價攜帶KGF和HIF-1ɑ雙基因的減毒沙門氏菌TPKH以及攜帶NK4和IL-2雙基因的減毒沙門氏菌TPIN的安全性。（2）探討攜帶雙基因的減毒沙門氏菌TPKH及TPIN對小鼠細胞免疫和小腸黏膜免疫的影響。方法（1）TPKH及TPIN小鼠急性毒性實驗。不同劑量(1.0×10⁸、1.0×10⁹、1.0×10¹⁰cfu/0.1mL·只)TPKH或TPIN灌胃后觀察對小鼠精神狀態(tài)、體重的影響;灌胃后第14天進行血常規(guī)、肝功腎功指標(biāo)及臟器指數(shù)的檢測,并取對照組和高劑量灌胃組小鼠(1.0×10¹⁰cfu/0.1mL·只)心、肝、脾、肺、腎及胃腸組織,制作病理切片,觀察各臟器組織形態(tài)。（2）TPKH及TPIN一般藥理學(xué)實驗。不同劑量（1.0×10⁷、1.0×10⁸、1.0×10⁹cfu/0.1mL·只）TPKH或TPIN灌胃后觀察對... 

【文章來源】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

TPKH對小鼠各臟器的影響（100×）

基因治療制劑TPKH和TPIN的初步安全性評價及其免疫作用探討19圖1-2TPIN對小鼠各臟器的影響（100×）注：1~7分別為心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胃、腸；A為對照組，B為高劑量組。4討論急性毒性實驗是指機體24小時內(nèi)一次或多次染毒的實驗，是藥物臨床前毒理學(xué)研究的第一步，為臨床安全用藥提供一定的參考[48]。依據(jù)《生物技術(shù)藥物安全性評價》中基因治療藥物非臨床安全性評價的有關(guān)要求，急性毒性實驗給藥劑量的選擇應(yīng)包括無明顯毒性反應(yīng)劑量，觀察到明顯毒性的劑量以及中間劑量，當(dāng)藥物毒性較低時，可給予最大可能獲得的劑量作為高劑量[47]。在課題組前期藥效學(xué)實驗中得到TPKH及TPIN的有效劑量為1.0×107~1.0×109cfu/只，因此在本實驗中，以1.0×108cfu/0.1mL·只的劑量作為無明顯毒性反應(yīng)的劑量。因TPKH及TPIN的毒性較低，無法獲得出現(xiàn)明顯毒性的劑量，在預(yù)實驗中，用1.0×1010cfu/0.1mL·只的劑量灌胃小鼠，在此劑量下小鼠無死亡，無明顯毒性反應(yīng)，且此劑量是在本實驗室條件下容易獲得的最大劑量，故本實驗將高劑量組（1.0×1010cfu/0.1mL·只）作為急性毒性實驗的最大給藥量。在觀察期間中，除由于藥物進入肺部，導(dǎo)致個別小鼠死亡外，在之后的觀察過程中未出現(xiàn)小鼠死亡現(xiàn)象。灌胃后

基因治療制劑TPKH和TPIN的初步安全性評價及其免疫作用探討30圖3-1KGF標(biāo)準(zhǔn)曲線3.1.1.2各組織中KGF表達水平TPKH灌胃后各組織中KGF表達水平如表3-1所示：胃組織中的表達情況為在灌胃后的12、24、48、72、96小時，顯著表達（P<0.05）；小腸組織中的表達情況為在灌胃后的12、24小時，極顯著表達（P<0.01），在灌胃后的48、72、96小時，顯著表達（P<0.05）；在心臟、肝臟、脾臟等其他組織內(nèi)表達不顯著（P>0.05）。表3-1各組織中KGF表達水平（ng/mL,x±s,n=4）0h12h24h48h72h96h心臟1.58±0.121.60±0.261.31±0.171.53±0.231.26±0.031.23±0.12肝臟1.40±0.101.60±0.211.38±0.141.54±0.291.29±0.081.36±0.03脾臟1.18±0.061.20±0.041.19±0.071.37±0.131.19±0.151.07±0.05肺臟1.42±0.191.32±0.141.34±0.171.59±0.231.43±0.061.37±0.91腎臟1.68±0.041.60±0.121.72±0.201.65±0.131.60±0.301.47±0.16胃1.56±0.091.90±0.23*1.90±0.05*1.81±0.14*1.83±0.11*1.87±0.06*小腸1.49±0.082.01±0.19**1.97±0.11**1.95±0.16**1.89±0.06**1.78±0.12*肌肉1.28±0.171.25±0.031.51±0.141.27±0.101.06±0.041.20±0.13腦1.27±0.061.33±0.141.54±0.221.42±0.181.32±0.041.24±0.09*與對照組相比，P<0.05，差異顯著；**與對照組相比，P<0.01，差異極顯著。3.1.2HIF-1ɑ基因表達蛋白水平3.1.2.1HIF-1ɑ標(biāo)準(zhǔn)曲線根據(jù)HIF-1ɑELISA試劑盒中提供的6個不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，以HIF-1ɑ濃度為橫坐標(biāo)，OD450nm吸光度值為縱坐標(biāo)繪制HIF-1ɑ標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如圖3-2所示。其線性回歸方程為y=0.0165x+0.1057，相關(guān)系數(shù)R值為0.9571，大于0.95，具有可行度和線性關(guān)

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3037805