發(fā)布時(shí)間：2021-02-06 22:13

　　目的:研究低氧預(yù)處理人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞是否對(duì)鼠放射性損傷涎腺上皮細(xì)胞具有保護(hù)及功能修復(fù)作用。方法:（1）3天大的SD大鼠新生鼠取其雙側(cè)下頜下腺腺體組織,利用酶消化法分離下頜下腺的細(xì)胞,胰蛋白酶差速消化法和差速貼壁法純化原代細(xì)胞;（2）下頜下腺細(xì)胞傳至P2時(shí),使用免疫組織化學(xué)法對(duì)細(xì)胞的角蛋白7（CK-7）進(jìn)行鑒定;（3）遵義醫(yī)科大學(xué)組織工程實(shí)驗(yàn)室提供P3人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞,并行流式細(xì)胞儀行細(xì)胞表型鑒定;（4）實(shí)驗(yàn)分為4組;空白對(duì)照組（頜下腺上皮細(xì)胞未行放射處理組）、5Gy放射對(duì)照組（頜下腺上皮細(xì)胞行5Gy放射處理但不和hAMSCs共培養(yǎng)組）、低氧共培養(yǎng)組（低氧預(yù)處理hAMSCs和頜下腺上皮細(xì)胞5Gy放射后共培養(yǎng)7天組）、常氧共培養(yǎng)組（hAMSCs和頜下腺上皮細(xì)胞5Gy放射后共培養(yǎng)處理7天組）;（5）利用電子直線加速器對(duì)P3代大鼠下頜下腺上皮細(xì)胞行5Gy放射處理;（6）按既定分組共培養(yǎng)7天后,分別收集每組細(xì)胞上清液,使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定各組下頜下腺上皮細(xì)胞唾液淀粉酶α1（AMY1）的含量;CCK-8（Cell Counting Kit-8）技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖活性;An... 

【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

倒置相差顯微鏡下觀察A.SD大鼠SMGCs原代培養(yǎng)第4天（×2

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文孔維平182結(jié)果2.1SD大鼠頜下腺細(xì)胞鏡下形態(tài)學(xué)特征原代培養(yǎng)4天后鏡下可見(jiàn)貼壁的上皮細(xì)胞，鏡下可見(jiàn)少量成纖維細(xì)胞混雜（見(jiàn)圖1A），胰蛋白酶差速消化法和差速貼壁法去除成纖維細(xì)胞后可得到形態(tài)較為均一的鼠下頜下腺上皮細(xì)胞，第12天鏡下可見(jiàn)細(xì)胞呈多角形，呈鵝卵石樣排列（見(jiàn)圖1B）。圖1.倒置相差顯微鏡下觀察原代SD大鼠SMGCs形態(tài)A.SD大鼠SMGCs原代培養(yǎng)第4天（×200）；B.SD大鼠SMGCs純化后（×400）2.2SD大鼠下頜下腺細(xì)胞的免疫學(xué)鑒定利用角蛋白（CK7）作為頜下腺上皮細(xì)胞的標(biāo)記蛋白。鏡下觀察可見(jiàn)CK7呈橙紅色染色（圖2A），CK7呈陽(yáng)性表達(dá)，證實(shí)細(xì)胞為上皮來(lái)源，PBS液為陰性對(duì)照組（圖2B）。圖2.熒光顯微鏡下觀察CK7免疫熒光A.CK7組（×400）；B.PBS對(duì)照組（×400）2.3hAMSCs的生長(zhǎng)形態(tài)及鑒定hAMSCs的P3細(xì)胞形態(tài)均一，呈長(zhǎng)梭形、類漩渦狀生長(zhǎng)(圖3A)，符合目前國(guó)際公認(rèn)hAMSCs的鏡下形態(tài)學(xué)特征。P3細(xì)胞免疫組化流式結(jié)果回示示P3

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文孔維平19hAMSCs陽(yáng)性表達(dá)CD44、CD73、CD90、CD105，陰性表達(dá)CD11b、CD19、CD34、CD45、HLA-DR(圖3B)，符合目前國(guó)際公認(rèn)hAMSCs的標(biāo)記物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。圖3.P3hAMSCs形態(tài)和鑒定A.P3hAMSCs形態(tài)；B.P3hAMSCs流式鑒定結(jié)果2.4共培養(yǎng)7天后各組唾液α-淀粉酶含量測(cè)定結(jié)果各組細(xì)胞按既定分組共培養(yǎng)7天后，使用ELISA對(duì)各組下頜下腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)48h后上清液中α-淀粉酶含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果示：空白對(duì)照組明顯高于低氧/

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[7]頜下腺移位術(shù)干預(yù)急性放射性口腔黏膜反應(yīng)及口干燥癥的臨床研究[J]. 周具華,高下,汪永干.  華西醫(yī)學(xué). 2010(02)
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碩士論文
[1]大鼠頜下腺上皮細(xì)胞放射性損傷模型的建立與評(píng)估[D]. 曹璐.遵義醫(yī)科大學(xué) 2019
[2]低氧預(yù)處理人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)放射性涎腺損傷功能的研究[D]. 王英鑫.遵義醫(yī)學(xué)院 2018
[3]角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2對(duì)煙霧吸入所致肺損傷修復(fù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 江政英.南昌大學(xué) 2017
[4]低氧預(yù)處理人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特征研究[D]. 代敏.遵義醫(yī)學(xué)院 2018



本文編號(hào)：3021175