目的:膿毒癥（Sepsis）的定義是宿主抗感染免疫失調引起的危及生命的器官功能障礙。膿毒癥發(fā)病率高,病情兇險,病死率高,是導致感染患者死亡的主要原因。但膿毒癥發(fā)病機制復雜,目前尚未明確。為研究膿毒癥致病機制,近期我們通過全基因組表達譜芯片篩選到一個在膿毒癥中發(fā)揮關鍵免疫調節(jié)作用的新分子—Prokineticin-2（PROK2或者PK2）。PK2屬于Prokineticin（前動力蛋白）家族,可高表達于外周血細胞、樹突狀細胞、淋巴細胞等重要免疫細胞,具有調節(jié)神經發(fā)育、血管生成、炎癥性疼痛等多種生物學效應,但PK2在膿毒癥中的作用目前尚無相關報道。因此,本研究擬檢測膿毒癥患者和膿毒癥小鼠中PK2的表達水平,明確其作為膿毒癥診斷標志物的潛在臨床價值,并進一步闡明PK2在膿毒癥中發(fā)揮免疫調節(jié)作用的具體分子機制,為膿毒癥機制研究提供新的實驗室證據,為膿毒癥的臨床治療提供新的策略。方法:從重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院收集47例成人膿毒癥患者和30例健康體檢者血清標本;從重慶醫(yī)科大學附屬兒童醫(yī)院收集31例兒童膿毒癥患者以及20例健康體檢者血清標本,采用ELISA法檢測血清中PK2表達水平;通過膿毒癥經... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數】：63 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

盲腸結扎穿刺術法構建小鼠膿毒癥模型

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文26圖2膿毒癥患者全血中PK2的表達量Figure2TheexpressionofPK2insepsis.(A)PK2concentrationsweretestedinserumsamplescollectedfrom47adultpatientswithsepsisandfrom21healthycontrolsubjects.(B)PK2concentrationsweretestedinserumsamplescollectedfrom31childrenpatientswithsepsisandfrom20healthycontrolsubjects.(C)PK2concentrationsweretestedinserumsamplesfromhealthycontrols,patientswithsepsisorsepticshock.3.1.2PK2在膿毒癥小鼠中的表達具有時間依賴性為了進一步驗證PK2在膿毒癥中的表達規(guī)律，并進行后續(xù)機制研究，首先我們構建了小鼠膿毒癥模型，收集不同時間點膿毒癥小鼠全血以及PLF，并通過ELISA檢測發(fā)現，如圖3所示，相較于正常對照組，膿毒癥小鼠體內PK2的表達具有時間依賴性，即早期呈一過性增加，并隨疾病進展逐漸降低，具有統(tǒng)計學意義。再次表明，PK2可能確實在膿毒癥中發(fā)揮重要的免疫調控作用。B

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文28圖4PK2處理后進行小鼠生存率實驗.Figure4SurvivaltestsofsepticmiceafteradministrationofrecombinantPK2.3.2.2PK2處理后可部分改善膿毒癥小鼠組織病理損傷情況由于膿毒癥是宿主抗感染免疫失調導致的器官功能障礙，膿毒癥進展后期多器官的功能衰竭是導致宿主死亡的直接因素。因此，我們又探索了PK2蛋白在膿毒癥小鼠多器官損傷中的影響。首先，我們構建了膿毒癥小鼠模型，收集并檢測建模后24h和48h后將小鼠安樂死，所取小鼠的肺臟、肝臟、腎臟以及脾臟組織，經HE染色后進行評估小鼠各組織器官的病理損傷情況，如圖5-A，發(fā)現rmPK2處理顯著改善了肺臟、肝臟等多器官的損傷。進一步通過檢測與損傷相關的生化指標發(fā)現，rmPK2處理組小鼠ALT、AST、Crea等損傷標志物較對照組降低，如圖5-B，5-C與HE染色結果相吻合。說明PK2蛋白可改善膿毒癥介導的多器官損傷。


本文編號：3019925