目的:通過谷氨酰胺酶抑制劑DON干預(yù)谷氨酰胺分解途徑,研究其對(duì)C57BL/6小鼠T細(xì)胞增殖的影響及對(duì)EAE疾病進(jìn)程的防治效果,闡明DON對(duì)小鼠Th17與iTreg細(xì)胞分化的調(diào)節(jié)作用,進(jìn)而為Th17介導(dǎo)的相關(guān)性疾�。ㄈ鏜S）防治藥物的設(shè)計(jì)、開發(fā)提供一條新穎的途徑。方法:1、分離出C57BL/6小鼠的脾臟,用0.2、0.5、1.0 μMCFSE對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色,優(yōu)化CFSE染色條件。利用分選試劑盒從脾細(xì)胞中分選出T細(xì)胞與CD4+T細(xì)胞,研究DON對(duì)T細(xì)胞增殖的影響。2、制備初始CD4+T細(xì)胞與抗原提呈細(xì)胞懸液,在培養(yǎng)基中加入促進(jìn)Th17細(xì)胞分化的相關(guān)細(xì)胞因子和抗體（如anti-mCD3/CD28、IL-6、TGF-β、anti-mIL-4、anti-mIFN-γ和 anti-mIL-2）;或在anti-mCD3/CD28預(yù)包被的細(xì)胞培養(yǎng)板中加入初始CD4+T細(xì)胞懸液,再加入促進(jìn)iTreg細(xì)胞分化的相關(guān)細(xì)胞因子（包括TGF-β和IL-2）,體外刺激初始細(xì)胞朝著Th17或iTreg細(xì)胞分化,優(yōu)化并確立細(xì)胞的最佳分化條件。3、在確立的最佳分化條件的基礎(chǔ)上,將不同濃度的DON作用于細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)分... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖４．１．１?ＣＦＳＥ的最佳染色條件??Ｆｉｇ?４．１．１?Ｏｐｔｉｍａｌ?ｄｙｅｉｎｇ?ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ?ｆｏｒ?ＣＦＳＥ??２１??

?南華大學(xué)項(xiàng)士學(xué)位論文???４．１．２?ＤＯＮ對(duì)ＣＤ４＋Ｔ細(xì)胞和ＣＤ８＋Ｔ細(xì)胞增殖的影響??將純化的Ｔ細(xì)胞進(jìn)行ＣＦＳＥ染色后，以每孔ｌｘｌ〇６個(gè)加入到４８孔板中。在??５％Ｃ０２、３７。。恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)３天。實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組和ＤＯＮ?（ＩｍＭ）處??理組。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)ＣＤ４—Ｔ細(xì)胞和ＣＤ８＋Ｔ細(xì)胞的増殖情況，流式結(jié)果發(fā)現(xiàn)，??與對(duì)照組相比，ＤＯＮ處理組的熒光強(qiáng)度增大，峰值往右移動(dòng)，細(xì)胞的增殖能力??下降。說明ＤＯＮ處理組可抑制ＣＤ４＋Ｔ和ＣＤ８＋Ｔ細(xì)胞的增殖（圖４．１．２）。??ＣＤ４＋丁細(xì)胞?ＣＤ８＋Ｔ細(xì)胞??８０３－?，??５００－??４００?－?６０３?－??Ｃｔｒｌ?Ｉ?３Ｋ：?＊?■瞥?Ｉ??ｔｉＵ?ｉｉＵ??〇?１０＊?ｔ〇４?ｔＯ＊?０?丨?０＊?１０?１０?１０??Ｃｏｍｐ－ＦＩＴＣ－Ａ?Ｃｏｍｓ－ＦＩＴＣ－Ａ??２００：?４００－?Ｉ??ＤＯＮ?５?，０°：?＾?Ｉ??…ｆ?Ｖ?１：：，．?／?Ｖ?．??ｏ?ｉｏ２?ｉｏ３?１０４?１０５?０?１０２?１０３?ｔｏ４?ｉｏ５??Ｃｏｍｐ－ＦＩＴＣ－Ａ?Ｃ〇ｍｐ－ＦＩＴＣ－Ａ??ｎ??Ｃｔｒｌ?—?Ｉ?ｉ?ｆ??１?ｂ?！?１｜??２?ｍ?１?ｌ??＊？?３?４?＜?）■．，■＞！，《ｎｔ＞ｊ?■?１?■■■—ｉ?????０，〇＇?，〇?，〇?’。?０?，０２?，０３?，０＊?，ｏｓ??Ｃｏｒｒｉｐ－ＦＩＴＣ－Ａ??Ｃ〇ｍｐ－Ｆ（ＴＣ－Ａ??圖４．１．２?ＤＯＮ對(duì)ＣＤ４＋Ｔ和ＣＤ８＋Ｔ細(xì)胞增殖的影響??Ｆｉｇ?４．１．２?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＤＯＮ?ｏｎ?ｐｒｏｌ

?ＩＬ－６：?１０?ｎｇ／ｍＬ??４００?－?／?Ｉ?ｉ?」??１?／?Ｉ?Ｉ?３?ａｎｔｉ－ＩＬ－４：４?＾ｇ／ｍＬ??／?￣ｓ＊?Ｉ，〇?ａｎｔｉ－ＩＬ－２：４＾ｇ／ｍＬ??：７?＼?Ｓ，：；＃＾＾Ｐ〇３?ａｎｔｉ－ＩＦＮＹ：４，ｇ／ｍＬ??〇?，■＂＂■＂Ｉ?Ｗ??奶丨?ＴＧＦ－Ｐ：?１０?ｎｇ／ｍＬ??０?１０?‘?１０３?１０４?１０ｓ?Ｃ?１〇２?１〇３?１〇４?１０５??Ｃｏｍｐ－ＡＦＣ－Ａ：?Ｃ０４?Ｃ〇ｍｐ－ＰＥ－Ｃｙ７－Ａ；：ＩＬ－１７Ａ??圖４．２．１?Ｔｈｌ７細(xì)胞的最佳分化條件??Ｆｉｇ?４．２．１?Ｏｐｔｉｍａｌ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ?ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ?ｏｆ?Ｔｈｌ７?ｃｅｌｌｓ??４．２．２?ＤＯＮ對(duì)Ｔｈ?１７細(xì)胞分化的影響??在?ＩＭＤＭ?完全培養(yǎng)基中，對(duì)照組（２?ｎｇ／ｍＬ?ａｎｔｉ－ＣＤ３／ＣＤ?２８，１０?ｎｇ／ｍＬ?ＩＬ－６，??４?ｆｉｇ／ｍＬ?抗?ＩＬ－４，?４?（ｉｇ／ｍＬ?抗?ＩＦＮ－?丫，１０?ｎｇ／ｍＬ?ＴＧＦ－?Ｐ?，?４?ｆｉｇ／ｍＬ?抗?ＩＬ－２?）與??ＤＯＮ?處理組（２?ｐｇ／ｍＬ?ａｎｔｉ－ＣＤ３／ＣＤ?２８，１０?ｎｇ／ｍＬ?ＩＬ－６，?４?（ｘｇ／ｍＬ?抗?ＩＬ－４，?４?｜ｉｇ／ｍＬ??抗?ＩＦＮ－?Ｙ，１?〇?ｎｇ／ｍＬ?ＴＧＦ－?Ｐ，４?ｎｇ／ｍＬ?抗幾－２，１?ｍＭ?ＤＯＮ）各設(shè)?３?個(gè)復(fù)孔。??培養(yǎng)５天后，進(jìn)行流式檢測(cè)。結(jié)果顯示，對(duì)照組的Ｔｈｌ７細(xì)胞分化率為３９．７％，??而ＤＯＮ處理組的Ｔｈｌ７細(xì)胞分化率僅為４．７７％，顯著低于對(duì)照組，表明ＤＯＮ能??夠抑制Ｔｈ?１７細(xì)胞分化。??Ｃｔｒｌ?ＤＯＮ??３９．７


本文編號(hào)：2998292