目的:阿霉素是一種有效治療乳腺癌的化療藥物,但阿霉素在臨床應(yīng)用中會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的心臟毒性。在前期的研究中發(fā)現(xiàn)丹參素衍生物BAA具有增強(qiáng)阿霉素抗乳腺癌并減輕心肌細(xì)胞毒性的作用,并發(fā)現(xiàn)ERp57是BAA的作用靶點(diǎn)之一。本文旨在探討ERp57在體外對(duì)阿霉素抗乳腺癌和對(duì)心肌細(xì)胞毒性的干預(yù)作用及其相關(guān)作用機(jī)制。方法:1.ERp57體外增強(qiáng)阿霉素抗乳腺癌及減輕心肌細(xì)胞毒性干預(yù)作用的研究首先驗(yàn)證ERp57過(guò)表達(dá)的MDA-MB-231細(xì)胞和H9c2細(xì)胞模型,采用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western Blot）確認(rèn)過(guò)表達(dá)。然后加入不同濃度的阿霉素（1μM、2μM、4μM、8μM）處理細(xì)胞24 h后,采用乳酸脫氫酶試劑盒和MTT法檢測(cè)細(xì)胞毒性和細(xì)胞存活率;在MDA-MB-231細(xì)胞和H9c2細(xì)胞（EV組和ERp57^H組）中加入2μM阿霉素處理細(xì)胞24 h后,固定細(xì)胞,進(jìn)行DAPI染色;野生型MDA-MB-231細(xì)胞和H9c2細(xì)胞采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染siRNA方法使ERp57基因沉默,經(jīng)Western Blot確認(rèn)轉(zhuǎn)染成功后,MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率。2.ERp57體外增強(qiáng)阿霉素抗乳腺癌及減輕心肌細(xì)胞毒... 

【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

ERp57基因過(guò)表達(dá)MDA-MB-231細(xì)胞模型的驗(yàn)證（標(biāo)尺=100μm）

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文師偉16圖2ERp57過(guò)表達(dá)對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞存活率和LDH釋放量的影響（A）細(xì)胞存活率；（B）LDH釋放量；Fig.2EffectofERp57onDox-inducedcellviabilityandLDHreleaseinMDA-MB-231cellsNote:*P<0.05vs.EVgroup;EV:emptyvectorMDA-MB-231group;ERp57H:ERp57highexpressionMDA-MB-231group.3.3ERp57基因過(guò)表達(dá)對(duì)阿霉素誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)胞凋亡的影響DAPI為一種能夠與DNA結(jié)合的熒光染料，可以穿過(guò)完整的細(xì)胞膜與細(xì)胞核中的雙鏈DNA結(jié)合，產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光。經(jīng)過(guò)DAPI染色后，正常細(xì)胞的細(xì)胞核核形完整，染色質(zhì)均勻，且呈現(xiàn)低亮度的藍(lán)色熒光，而凋亡的細(xì)胞細(xì)胞核破裂形成碎片，核解體，染色質(zhì)也進(jìn)一步固縮，形成很多顆粒物質(zhì)且顏色加深。在圖3中，我們明顯觀察到，EV組和ERp57H組中細(xì)胞核呈規(guī)則的橢圓狀，顏色呈均勻藍(lán)色低密度的熒光，但經(jīng)阿霉素（2μM）加藥處理24h后，細(xì)胞核數(shù)量顯著減少，部分細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)出碎片狀和致密濃染等典型的凋亡特征（結(jié)果中白色箭頭所指），圖中結(jié)果顯示，與EV+Dox（空載體MDA-MB-231+Dox）組相比，ERp57H+Dox（ERp57過(guò)表達(dá)MDA-MB-231+Dox）組細(xì)胞凋亡明顯減少（P*<0.05，圖3B），由此說(shuō)明，在MDA-MB-231細(xì)胞中，ERp57基因過(guò)表達(dá)可顯著減少阿霉素誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞凋亡。

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文師偉17圖3ERp57基因過(guò)表達(dá)對(duì)阿霉素誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)胞凋亡的影響（標(biāo)尺=100μm）（A）MDA-MB-231細(xì)胞DAPI染色照片；（B）細(xì)胞凋亡率統(tǒng)計(jì)結(jié)果；Fig.3EffectofoverexpressionofERp57onDox-inducedapoptosisinMDA-MB-231cellsNote:*P<0.05vs.EV+Doxgroup;EV:emptyvectorMDA-MB-231group;ERp57H:ERp57highexpressionMDA-MB-231group;EV+Dox:emptyvectorMDA-MB-231+Doxgroup;ERp57H+Dox:ERp57highexpressionMDA-MB-231+Doxgroup;Dox:doxorubicin.Scalebar:100μm.3.4ERp57基因沉默后對(duì)阿霉素誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)胞存活率的影響采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染siRNA干擾的方法使ERp57基因沉默。用WesternBlot方法檢測(cè)ERp57蛋白含量表達(dá)變化情況。在圖4中可以觀察到，ERp57-siRNA干擾后，與陰性對(duì)照Scramble組相比，ERp57蛋白表達(dá)明顯下調(diào)（P*<0.05，圖4A），表明ERp57-siRNA干擾成功。對(duì)ERp57基因沉默后的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞存活率檢測(cè)，加入不同濃度的阿霉素處理24h后，MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，從結(jié)果中可以看出，在MDA-MB-231細(xì)胞中，與陰性對(duì)照Scramble組相比，ERp57-siRNA基因沉默后細(xì)胞存活率進(jìn)一步降低（P*<0.05，圖4B）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中，ERp57基因沉默后可顯著降低阿霉素誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞存活率。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在肝臟糖脂代謝及代謝性肝病中的作用[J]. 程涵博,呂頌雅,劉勇.  中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2019(11)
[2]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白在阿霉素誘導(dǎo)的急性心肌損傷中的表達(dá)及意義[J]. 萬(wàn)軍,王震,葉晶,吉慶偉,劉伶,施瑩,林英忠.  中華老年心腦血管病雜志. 2017(12)
[3]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 鐘強(qiáng),陳小伍,朱達(dá)堅(jiān).  廣東醫(yī)學(xué). 2015(12)
[4]蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶A3——疾病治療的新靶點(diǎn)[J]. 胡玥,陶麗媛,呂賓.  中國(guó)病理生理雜志. 2015(06)
[5]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的細(xì)胞效應(yīng)分子機(jī)制[J]. 馬光斌,陸倫根.  生命科學(xué). 2012(03)
[6]siRNA沉默ERp57對(duì)細(xì)胞中CRT表達(dá)與定位的影響[J]. 楊建林,韓鈺,王艷林.  生物技術(shù)通報(bào). 2012(01)
[7]藥物心臟毒性反應(yīng)與藥物警戒[J]. 劉蓓菁.  藥物流行病學(xué)雜志. 2011(04)
[8]缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)[J]. 馬青變,高煒,郭艷紅,趙春玉,薛林,唐朝樞.  北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2005(04)
[9]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)分子機(jī)理研究進(jìn)展[J]. 李載權(quán),周愛(ài)儒,唐朝樞.  中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2004(03)

博士論文
[1]人精子冷凍復(fù)蘇過(guò)程中能量代謝功能紊亂的相關(guān)機(jī)制研究[D]. 傅龍龍.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2019



本文編號(hào)：2995587