目的:1)分析環(huán)境濃度NP長期暴露是否會影響雄性大鼠甲狀腺激素水平及功能的穩(wěn)態(tài),探討雌激素受體與甲狀腺素受體在NP致甲狀腺疾病中的表達情況。2)分析鋅硒茶攝入對環(huán)境濃度NP長期暴露而引起的雄性大鼠甲狀腺功能損傷及增生性病變的干預(yù)作用,探討鋅硒茶對NP致甲狀腺功能損傷的保護作用機制。方法:240只雄性SD大鼠共分為7組（空白對照組,0.4mg/kg/d,4mg/kg/d,40mg/kg/d NP暴露組,30μg/kg/d E₂組,普通茶治療組,鋅硒茶治療組）。每日按體重灌胃,灌胃量為5ml/kg/day,連續(xù)灌胃染毒34周,茶葉干預(yù)組染毒NP劑量與高劑量組相同,第18周開始進行茶葉干預(yù)。染毒組分兩次剖殺取材（17周、34周）,茶葉干預(yù)組于第34周剖殺取材。解剖前對大鼠進行甲狀腺B超檢查,利用ELISA法檢測血清FT3、FT4、TSH水平,高效液相色譜法檢測甲狀腺組織和血清NP蓄積水平。甲狀腺左葉用于透射電鏡觀察超微組織結(jié)構(gòu)、HE切片觀察大鼠甲狀腺組織損傷情況、免疫組化切片比較ERα、ERβ,TRα、TRβ蛋白的表達情況。甲狀腺右葉使用高效液相色譜法檢測甲狀腺組織中N... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同樣品中NP蓄積水平有相關(guān)研究表示，NP會通過模擬雌激素的作用來破壞機體的內(nèi)分泌功能[13]，

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文王林14圖2大鼠染毒流程圖1.4.1大鼠甲狀腺B超圖像采集解剖前一周于遵義醫(yī)科大學(xué)藥理學(xué)國家重點實驗室，對大鼠進行甲狀腺B超檢查，實驗大鼠腹腔注射20%氨基甲酸乙酯（5ml/kg）麻醉，麻醉后剃毛取仰臥位，采集甲狀腺B超圖像，觀察有無低回聲區(qū)出現(xiàn)。1.4.2動物組織及血液采集大鼠分兩次取材（分別持續(xù)灌胃染毒17周、34周），剖殺前隔夜禁食，剖殺當日采用腹腔注射20%氨基甲酸乙酯（5ml/kg）對實驗大鼠麻醉，麻醉后經(jīng)腹主動脈取血（用于檢測激素水平及血清NP含量，每只大鼠總?cè)⊙考s為5mL），4℃冰箱內(nèi)靜置12h后離心取血清放置于-80℃冰箱備用；取血完成后，用剪刀將大鼠胸廓打開，沿氣管找到甲狀腺準確位置后，用剪刀迅速剝離甲狀腺組織，甲狀腺組織使用生理鹽水洗凈，置于濾紙吸干水分后稱重，取左側(cè)甲狀腺組織浸泡在4％多聚甲醛或2.5%戊二醛溶液中固定（供切片實驗及電鏡圖片采集使用），右側(cè)甲狀腺組織直接置于EP（Eppendorftube，EP）管內(nèi)并于-80℃超低溫冰箱中凍存?zhèn)溆茫ü〩PLC、WesternBlot等實驗使用）。

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文王林16單個樣品檢測時間：6.0min，出峰時間：3.5min。定量分析：樣品處理后所得的峰面積與標準品所得的標準曲線相比較，計算得出樣品中NP的實際濃度。質(zhì)量控制：為避免洗滌劑中NP干擾，玻璃試管均用重鉻酸浸泡后使用。試管清洗干凈后，置于70℃烘箱烘干。使用前再用正己烷淋洗兩次。圖3HPLC法檢測NP含量標準曲線1.4.6甲狀腺組織病理學(xué)變化（1）常規(guī)組織學(xué)觀察：左側(cè)甲狀腺組織稱量后迅速放入裝滿4%多聚甲醛溶液的EP管中（溶液淹沒組織）固定24h。通過脫水，透明，浸蠟，包埋，切片，貼片，烘片，二甲苯脫蠟，酒精梯度（100%，95%，80%，70%）滲水，蘇木精染色，水洗，1%鹽酸乙醇分化，漂洗，返藍，流水沖洗，0.5%伊紅復(fù)染，梯度酒精脫水（70%，80%，95%，100%），二甲苯透明，中性樹膠封存等操作后，制成HE切片。于光學(xué)顯微鏡下觀察甲狀腺組織的形態(tài)學(xué)改變。使用ImajeJ軟件采集HE切片圖像中濾泡上皮厚度及單個濾泡面積定量數(shù)據(jù)。（2）超微組織結(jié)構(gòu)觀察：切取大鼠左側(cè)甲狀腺組織約1立方毫米組織，放入2.5%中性戊二醛中固定（4℃，2-4h），經(jīng)0.1M磷酸緩沖液PBS漂洗（15min×3次），1%的鋨酸·0.1M磷酸緩沖液PBS固定（20℃，2h），0.1M磷酸緩沖液PBS漂洗（15min×3次），組織脫水（組織依次入50%-70%-80%-90%-95%-100%-100%酒精-100%丙酮-100%丙酮，每次15min），滲透（丙酮︰812包埋劑=1︰1（2-4h），丙酮︰812

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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