目的:本研究旨在構(gòu)建mPEG-CS-cRGD/Bmi-1RNAi-PTX納米緩釋微粒,考察其形態(tài)、粒徑、包封率、載藥量等理化特性;體外干預(yù)喉癌Hep-2細(xì)胞,MTT法觀察其對喉癌細(xì)胞的殺傷作用,為喉癌生物治療的臨床轉(zhuǎn)化奠定基礎(chǔ)。方法:1、設(shè)計3條Bmi-1 shRNA和1條NC序列,分別與PCO24-pGenesil-1質(zhì)粒連接構(gòu)建3組Bmi-1RNAi重組質(zhì)粒和1組無效重組質(zhì)粒,并測序鑒定;2、通過RT-qPCR的方法檢測重組干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后,Bmi-1基因的表達(dá)情況,并篩選出干擾效果最佳的干擾質(zhì)粒。3、采用透析法制備mPEG-CS納米載體,進(jìn)行核磁共振氫譜表征（¹H-NMR）分析,瓊脂糖凝膠電泳考察其DNA保護(hù)作用、基因包裹能力,MTT法考察其細(xì)胞毒性;4、采用超聲振蕩和簡單絡(luò)合的方法合成mPEG-CS-cRGD/Bmi-1RNAi-PTX納米緩釋微粒,考察其形態(tài)、粒徑和Zeta電位,計算包封率和載藥量;5、MTT實驗分為4組:PTX、mPEG-CS/PTX、mPEG-CS-cRGD/PTX和mPEG-CS-cRGD/Bmi-1RNAi-PTX組,分... 

【文章來源】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

PCO24-pGenesil-1質(zhì)粒示意圖

mPEG-CS-cRGD/Bmi-1RNAi-PTX納米緩釋微粒的構(gòu)建及體外殺傷喉癌細(xì)胞作用研究26線是單峰，擴(kuò)增曲線近乎平行說明對GAPDH和Bmi-1基因均進(jìn)行了準(zhǔn)確有效的擴(kuò)增，且擴(kuò)增效率基本一致，產(chǎn)物特異性好，無引物二聚體產(chǎn)生（圖3B、3C）。三條Bmi-1shRNA在293T細(xì)胞中均有干擾下調(diào)效果，干擾后Bmi-1的相對表達(dá)量分別為0.118±0.003、0.124±0.017、0.172±0.007（表10、圖3D）。后續(xù)實驗將選用干擾效果最好的shRNA1組質(zhì)粒與納米載體構(gòu)建納米緩釋微粒。表9紫外分光光度計檢測RNA提取質(zhì)量檢測結(jié)果樣品名稱A260/A280RNA濃度(ng/uL)shRNA-nc1.93579shRNA31.89553shRNA21.92548shRNA11.91559圖3ARNA瓊脂糖凝膠電泳分析（1：shRNA-nc；2：shRNA3；3：shRNA2；4：shRNA1）123428S18S5S

mPEG-CS-cRGD/Bmi-1RNAi-PTX納米緩釋微粒的構(gòu)建及體外殺傷喉癌細(xì)胞作用研究27圖3BGAPDH基因溶解擴(kuò)增曲線圖3CBmi-1shRNA基因溶解擴(kuò)增曲線表10RT-qPCR數(shù)值分析（n=3）樣本組2-△△Ct值第1次第2次第3次均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差shRNA10.1150.1200.1200.118±0.003shRNA20.1360.1320.1040.124±0.017shRNA30.1700.1790.1660.172±0.007shRNA-nc1.0021.0020.9951.000±0.004


本文編號：2984108