目的:探討中草藥化合物毛蕊花糖苷對肝癌細(xì)胞侵襲、遷移的影響及其分子機制。方法:將不同濃度（0μM,40μM,60μM,80μM,100μM,120μM）的毛蕊花糖苷加入人肝癌HepG2細(xì)胞,分別作用24小時、48小時和72小時,在倒置顯微鏡下觀察毛蕊花糖苷對人肝癌HepG2細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響,CCK8法檢測毛蕊花糖苷對肝癌細(xì)胞增殖的影響,并確定下一步的藥物濃度和作用時間。細(xì)胞劃痕實驗檢測毛蕊花糖苷對人肝癌HepG2細(xì)胞運動能力的影響,Transwell小室實驗檢測毛蕊花糖苷對人肝癌HepG2細(xì)胞侵襲及遷移的影響,Western Blot檢測毛蕊花糖苷對ERK5、p-ERK5以及基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9、MMP-2表達(dá)的影響。結(jié)果:1.細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化:隨著毛蕊花糖苷濃度的遞增,人肝癌HepG2細(xì)胞的數(shù)量明顯減少,形態(tài)逐漸變圓,貼壁性變差,可看見增多的漂浮壞死細(xì)胞,細(xì)胞間的連接稀疏,邊界模糊不清,還可看到一些形態(tài)不完整細(xì)胞。2.CCK-8結(jié)果:隨著毛蕊花糖苷濃度的增加和時間的延長,人肝癌HepG2細(xì)胞的活性逐漸降低,增殖能力受到不同程度的抑制,并呈現(xiàn)一定的濃度、時間依耐性。IC50約為98μ... 

【文章來源】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度和時間的毛蕊花糖苷對肝癌細(xì)胞的抑制率的影響，差異具有顯著性,*p﹤0.05,**p﹤0.01

2. 毛蕊花糖苷影響人肝癌 HepG2 細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化將濃度為（0μM， 40μM，60μM，80μM，100μM，120μM）的毛蕊花糖苷，加入到人肝癌 HepG2 細(xì)胞 24 小時后，鏡下可見 0μM 的細(xì)胞數(shù)量多，細(xì)胞形態(tài)呈梭形或者菱形，細(xì)胞與細(xì)胞間的連接緊密，并且貼壁良好，而隨著藥物濃度的增加，人肝癌 HepG2 細(xì)胞的數(shù)量明顯減少，形態(tài)逐漸變圓，細(xì)胞體積明顯縮小，貼壁性能逐漸變差，逐漸可看見增多的漂浮的壞死細(xì)胞，細(xì)胞之間的聯(lián)系稀疏，邊界模糊不清，并出現(xiàn)了一些形態(tài)不完整的細(xì)胞（圖 2）。

毛蕊花糖苷通過ERK5信號通路影響肝癌細(xì)胞侵襲及遷移的實驗研究27withtheblankcontrolgroup,*p﹤0.05,**p﹤0.01.#Comparedwiththepositivecontrolgroup#p﹤0.05,##p﹤0.01.CD圖3-C毛蕊花糖苷對人肝癌HepG2細(xì)胞遷移能力的影響（×20倍）；圖3-D各濃度組對人肝癌HepG2細(xì)胞的遷移細(xì)胞數(shù)目的影響，具有統(tǒng)計學(xué)差異,*表示與空白對照組比較，*P＜0.05，**p﹤0.01。#表示與陽性對照組比較，#p﹤0.05,##p﹤0.01。Fig.3-CEffectofVerbascosideonmigrationofHepG2cells(×20);Fig.3-DEffectofdifferentgrouponthenumberofmigrationsinhumanhepatocellularcarcinomaHepG2cells.*Comparedwiththeblankcontrolgroup,*p﹤0.05,**p﹤0.01.#Comparedwiththepositivecontrolgroup#p﹤0.05,##p﹤0.01.3.2毛蕊花糖苷抑制人肝癌HepG2細(xì)胞的侵襲能力觀察細(xì)胞瓶中人肝癌HepG2細(xì)胞漲至80-90%時，設(shè)置空白對照組、實驗組、陽性對照組，作用24小時，采用Transwell小室法檢測毛蕊花糖苷對人肝癌HepG2細(xì)胞侵襲能力的影響。如圖所示，與空白對照組相比，實驗組穿過小室的細(xì)胞數(shù)目明顯減少，穿膜的能力逐漸減弱（圖3-E）。其中，空白對照組、實驗組（80μM，100μM）和陽性對照組的細(xì)胞侵襲數(shù)目分別為419.80±19.1個、211.07±15.64

【參考文獻(xiàn)】：
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