目的:研究三葉苷（TLB）延緩秀麗隱桿線蟲衰老的作用,并探究其可能的作用機制。方法:同期化的秀麗隱桿線蟲株均在新鮮的NGM板上20°C培養(yǎng)2-3代后用于實驗。在正常培養(yǎng)條件下觀察不同濃度TLB（62.5、125、250μM）對秀麗隱桿線蟲壽命的影響,并篩選出TLB的最佳延壽濃度。由于250μM TLB的延壽效果最佳,因此在后續(xù)實驗中采用該濃度進行實驗。將實驗秀麗隱桿線蟲隨機分為對照組及250μM TLB組,通過檢測秀麗隱桿線蟲生殖力、移動力、脂褐質(zhì)及咽泵速率等評價TLB對正常壽命相關生理指標的影響。在此基礎上,將對照組和250μM TLB組秀麗隱桿線蟲于20°C條件下培養(yǎng)72 h,然后在35°C條件下孵育2 h進行熱應激實驗,或將秀麗隱桿線蟲轉移到含百草枯的NGM板上,在20°C條件下孵育進行氧化應激實驗。通過ELISA法檢測秀麗隱桿線蟲體內(nèi)活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、SOD及其亞型（SOD1、SOD2和SOD3）、過氧化物酶（CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的水平。采用熒光顯微鏡檢測CF1139（DAF16::GFP）、CL2166（GST4:... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學貴州省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

在正常培養(yǎng)條件下（20°C），TLB延長了野生型秀麗隱桿線蟲的壽命（A）TLB的結構示意圖；（B）

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文李納21圖3TLB能增強秀麗隱桿線蟲的應激耐受力（A）百草枯誘導下的Kaplan-Meier生存曲線；（B）35°C條件下Kaplan-Meier生存曲線；（C）蛋白質(zhì)SOD3和HSP16.2的平均像素熒光強度，（標尺=100μm）；（D）量化蛋白質(zhì)SOD3和HSP16.2，應用ImageProPlus軟件量化蛋白SOD3和HSP16.2含量的變化情況。數(shù)據(jù)以三次獨立實驗的x±SEM表示，與對照組相比，*P<0.05。

遵義醫(yī)科大學碩士學位論文李納23圖4TLB改變了衰老秀麗隱桿線蟲的行為表現(xiàn)（A）繁殖實驗，計數(shù)秀麗隱桿線蟲每日和總的產(chǎn)卵量；（B）秀麗隱桿線蟲身體移動實驗；（C）秀麗隱桿線蟲咽泵速率實驗；（D）250μMTLB和對照組eat2（DA1116）II秀麗隱桿線蟲的生存曲線；（E-F）應用ImageProPlus軟件量化秀麗隱桿線蟲體內(nèi)自發(fā)熒光脂褐質(zhì)的平均熒光強度，（標尺=100μm）。數(shù)據(jù)以三次獨立實驗的x±SEM表示，與對照組相比，*P<0.05。Figure4TLBchangedbehaviorsinagingC.elegans.(A)Progenyproductionassays.(B)Bodymovementassays.(C)PharyngealpumpingrateofC.elegansassays.(D)Thesurvivalcurvesofeat2(ad1116)IIC.elegansraisedon0μΜand250μMTLBat20°C.(E,F)LipofuscinautofluorescenceintensityweredetectedbyapplyingtheImageProPlussoftwarebyquantifyingthemeanpixelintensity.Magnification,100ⅹ;scalebar=100μm.Datawerepresentedasmean±SEM.*P


本文編號：2954394