目的探討lnc RNA Gm2115對糖尿病腎病骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移的影響以及潛在的機(jī)制。方法運(yùn)用二代測序技術(shù)（RNA sequencing,RNA-seq）檢測正常小鼠及糖尿病腎�。╠iabetic nephropathy,DN）模型小鼠腎臟組織中差異表達(dá)的長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA,lnc RNA）,采用實(shí)時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR,q RT-PCR）檢測候選lnc RNA在DN模型小鼠及對照小鼠腎臟組織中的表達(dá)情況。我們采用C57BL/6J雄性小鼠提取股骨和脛骨的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）進(jìn)行原代培養(yǎng),通過流式細(xì)胞儀檢測BMSCs表面標(biāo)志物、成骨成脂誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)對第三代BMSCs進(jìn)行鑒定。對BMSCs進(jìn)行DN樣微環(huán)境（高糖、高脂多糖、高糖基末期終產(chǎn)物）培養(yǎng),構(gòu)建DN BMSCs模型,運(yùn)用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測DN BMSCs和正常BMSCs的遷移能力。通過q RT-PCR檢測候選DN相關(guān)的lnc RNA,僅lnc RNA Gm2115的差異表達(dá)趨勢... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

RNA-seq檢測正常和DN模型小鼠腎臟組織差異表達(dá)lncRNAs

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文21圖1.2qRT-PCR檢測13個候選lncRNA在正常和DN模型小鼠腎臟組織中的表達(dá)(*，p<0.05；**，p<0.01；NS，nosignificant)Fig1.2ThethirteenlncRNAcandidatesweredetectedbyqRT-PCRinkidneytissuesofnormalandDNmice(*，p<0.05；**，p<0.01；NS，nosignificant)3.2小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)及鑒定我們采用C57BL/6J雄性小鼠提取股骨和脛骨BMSCs進(jìn)行原代培養(yǎng)，通過流式細(xì)胞儀檢測BMSCs表面標(biāo)志物、成骨成脂誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)對第三代BMSCs進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示，第三代BMSCs高表達(dá)CD29，陽性表達(dá)率為99.1%，CD45表達(dá)呈低表達(dá)，表達(dá)率為7.71%（圖1.3）；成脂誘導(dǎo)液培養(yǎng)21天后，鏡下觀察可見部分細(xì)胞可被染成點(diǎn)狀橘紅色，說明BMSCs分化為脂肪樣細(xì)胞；成骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)28天后細(xì)胞可被染成橘紅色，并且出現(xiàn)鈣結(jié)節(jié)，說明BMSCs分化成骨樣細(xì)胞(圖1.4)。以上結(jié)果表明BMSCs模型構(gòu)建成功，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

流式細(xì)胞儀檢測BMSCs表面標(biāo)志物CD29、CD45的表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Risks of rapid decline renal function in patients with type 2 diabetes[J]. Yi-Jing Sheen,Wayne HH Sheu.  World Journal of Diabetes. 2014(06)



本文編號：2952587