目的:為了完善廣地龍質(zhì)量控制體系,本研究對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行系統(tǒng)研究。在《中國(guó)藥典》2015年版已收載廣地龍性狀、鑒別、檢查等檢測(cè)項(xiàng)的基礎(chǔ)上補(bǔ)充廣地龍的DNA條形碼基源鑒別方法;建立廣地龍的含量測(cè)定方法與指紋圖譜檢測(cè)、分析方法;確定廣地龍標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備工藝,研究廣地龍標(biāo)準(zhǔn)湯劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),為廣地龍相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供參考。方法:1.采用DNA條形碼技術(shù)對(duì)收集到的廣地龍樣品進(jìn)行基源鑒定,結(jié)合2015年版《中國(guó)藥典》中廣地龍性狀、顯微鑒別、薄層鑒別、檢查、浸出物測(cè)定,確保用于課題研究、實(shí)際生產(chǎn)的廣地龍樣品均為正品。2.采用高效液相色譜(HPLC)法,建立廣地龍中次黃嘌呤、肌苷的含量測(cè)定方法,建立廣地龍HPLC指紋圖譜共有模式。3.以出膏率、次黃嘌呤和肌苷含量總量的轉(zhuǎn)移率為評(píng)價(jià)指標(biāo),進(jìn)行單因素考察,包括加水倍數(shù)、浸泡時(shí)間、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)等因素,將最佳因素水平范圍篩選出來(lái);然后進(jìn)行正交試驗(yàn),詳細(xì)考察具體參數(shù),通過(guò)正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析,優(yōu)選出廣地龍標(biāo)準(zhǔn)湯劑最佳制備工藝參數(shù),并進(jìn)行工藝驗(yàn)證。4.收集13批次廣地龍樣品,以確定的制備工藝制備廣地龍標(biāo)準(zhǔn)湯劑,測(cè)定pH值、總固體、指標(biāo)成分含量,計(jì)算指標(biāo)成分的轉(zhuǎn)移... 

【文章來(lái)源】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)湖北省

【文章頁(yè)數(shù)】：98 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

凝膠電泳圖

廣地龍質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升及標(biāo)準(zhǔn)湯劑研究13樣品DNA條形碼序列的獲得：使用專(zhuān)業(yè)軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行序列拼接，將引物區(qū)去除，獲得樣品相應(yīng)的DNA條形碼序列。結(jié)果判定：在中藥材DNA條形碼鑒定系統(tǒng)或GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中應(yīng)用BLAST方法對(duì)獲得的序列進(jìn)行結(jié)果判定。系統(tǒng)鑒定結(jié)果如圖1-4。圖1-4中藥材DNA條形碼鑒定系統(tǒng)鑒定結(jié)果結(jié)果顯示，30批樣品中有12批樣品DNA可在中藥材DNA條形碼鑒定系統(tǒng)中鑒定為Amynthasaspergillus，即參環(huán)毛蚓；其余部分在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中可查詢到接近物種。因此，建立的DNA條形碼基源鑒別方法可用于廣地龍藥材的鑒別。2.3檢查2.3.1水分稱(chēng)取廣地龍樣品粉末，并平鋪于已干燥至恒重的扁形稱(chēng)量瓶中，由于地龍粉末質(zhì)地疏松，建議平鋪厚度不超過(guò)10mm，按照水分測(cè)定法----烘干法（2015年版《中國(guó)藥典》通則0832第二法），測(cè)定廣地龍樣品中水分的含量。結(jié)果：30批廣地龍樣品水分均小于12.0%，符合藥典要求，結(jié)果見(jiàn)表1-6。

廣地龍質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升及標(biāo)準(zhǔn)湯劑研究21甲醇-5mmol/L乙酸銨溶液流動(dòng)相系統(tǒng)甲醇-10mmol/L乙酸銨溶液流動(dòng)相系統(tǒng)圖1-6流動(dòng)相系統(tǒng)的考察結(jié)果：洗脫梯度均為流動(dòng)相：有機(jī)相（B）-水相（A），梯度洗脫：0～10min，A相99％；10～25min，A相99％～90％時(shí)，分析圖譜，發(fā)現(xiàn)有機(jī)相選擇甲醇更適合分離，水相為5mmol/L乙酸銨溶液或10mmol/L乙酸銨溶液時(shí)，對(duì)分離度并沒(méi)有顯著的優(yōu)化，因此選擇甲醇-水流動(dòng)相系統(tǒng)。2.5.2.3甲醇-水流動(dòng)相系統(tǒng)梯度洗脫的優(yōu)化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]地龍炮制品HPLC指紋圖譜的建立及5種成分測(cè)定[J]. 譚玲龍,鐘凌云,宋嬿,張玉蓮,瞿光航.  中成藥. 2018(10)
[4]提高滬地龍藥材質(zhì)量的加工方法研究[J]. 季倩,徐銀霞,張漢明,張磊.  藥學(xué)服務(wù)與研究. 2018(04)
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[6]地龍的采收加工、炮制和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究進(jìn)展[J]. 熊頌強(qiáng),鐘凌云,宋嬿,張玉蓮,陳風(fēng)晨.  江西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2018(01)
[7]HPLC法測(cè)定滬地龍中7個(gè)核苷類(lèi)成分的含量[J]. 周恒,曹依敏,苗水,王少敏,陳銘,蘭嵐,季申.  藥物分析雜志. 2018(01)
[8]不同產(chǎn)地地龍藥材的微性狀鑒別及品質(zhì)研究[J]. 郭利霄,王乾,張丹,鄭開(kāi)顏,鄭玉光,侯芳潔.  中藥材. 2018(01)
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[10]地龍顆粒劑的制備工藝及質(zhì)量初步評(píng)價(jià)[J]. 倪妮,馬格非,楊曄.  廣州化工. 2016(19)

博士論文
[1]廣地龍的平喘活性及其機(jī)制的研究[D]. 黃傳奇.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2016

碩士論文
[1]采用甘草炮制廣地龍的工藝及其炮制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D]. 朱啟亮.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2018
[2]地龍平喘有效部位的物質(zhì)基礎(chǔ)研究[D]. 劉君怡.湖北中醫(yī)藥大學(xué) 2016
[3]蚯蚓提取物對(duì)小鼠燙傷治療效果的研究[D]. 周偉.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[4]酒地龍、酒牡丹皮的炮制工藝及飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D]. 別甜甜.廣東藥學(xué)院 2015
[5]地龍對(duì)哮喘小鼠氣道重組的作用研究[D]. 唐秋鳳.廣東藥學(xué)院 2014
[6]廣地龍配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化研究及地龍凝膠劑的研制[D]. 何琳.廣東藥學(xué)院 2007



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