抗生素耐藥日益嚴(yán)重的威脅著人類(lèi)的健康。在臨床治療中由于缺少快速、準(zhǔn)確的病原菌抗生素耐藥性診斷數(shù)據(jù)而導(dǎo)致錯(cuò)誤及過(guò)度使用抗生素,其是產(chǎn)生抗生素耐藥性的一個(gè)重要原因。產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶是導(dǎo)致革蘭氏陰性菌產(chǎn)生抗生素耐藥性的一個(gè)最主要的機(jī)制。在千余種β-內(nèi)酰胺酶中,由于超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）和碳青霉烯酶對(duì)具有廣譜抗菌作用的3代、4代頭孢菌素及碳青霉烯類(lèi)抗生素具有耐藥作用,因此在抗感染治療中被列為重點(diǎn)監(jiān)測(cè)、檢測(cè)目標(biāo)。目前ESBLs NDP、Carba NP及表型鑒定法是檢測(cè)產(chǎn)ESBLs和碳青霉烯酶耐藥菌的主要方法,但是這些方法在檢測(cè)靈敏性和檢測(cè)時(shí)間上都還有不足。固相有青霉素酶的酶熱傳感器（青霉素酶酶熱傳感器）可對(duì)奶液中非法外源添加青霉素酶進(jìn)行有效檢測(cè),但該傳感器由于本質(zhì)上對(duì)頭孢菌素類(lèi)及碳青霉烯類(lèi)抗生素?zé)o法有效水解而不能應(yīng)用于產(chǎn)ESBLs和碳青霉烯酶耐藥菌的檢測(cè)。本研究利用對(duì)頭孢菌素類(lèi)和碳青霉烯類(lèi)抗生素均具有廣譜水解活性的新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶-1（NDM-1）建立NDM-1酶熱傳感器,評(píng)價(jià)該傳感器聯(lián)合β-內(nèi)酰胺酶抑制劑在檢測(cè)ESBLs、碳青霉烯酶及產(chǎn)ESBLs和碳青霉烯酶耐藥菌的敏感性和有效... 

【文章來(lái)源】：山西大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

應(yīng)用NDM-1酶熱傳感器快速檢測(cè)產(chǎn)ESBLs和碳青霉烯酶耐藥菌原理圖

應(yīng)用酶熱傳感器進(jìn)行抗生素耐藥性檢測(cè)研究10生素溶液，然后將不同抗生素上樣到NDM-1酶熱傳感器（上樣時(shí)上樣緩沖液與配置抗生素的緩沖液一致）并記錄反應(yīng)產(chǎn)生的電信號(hào)數(shù)據(jù)。每隔5天檢測(cè)一次，連續(xù)檢測(cè)40天。2.3.5NDM-1酶熱傳感器最適pH的測(cè)定分別配制pH8.0、pH7.5、pH7.0、pH6.5、pH6.0含有10uMZn2+的1×PBS上樣緩沖液。用不同pH的緩沖液分別配制終體積為500uL、濃度為200mg/L的青霉素（PenicillinG）、哌拉西林（Piperacillin）、頭孢曲松（Ceftriaxone）、頭孢唑啉（Cefazolin）、頭孢吡肟（Cefepime）、美羅培南（Meropenem）。然后在不同pH的上樣緩沖液條件下測(cè)定六種抗生素通過(guò)NDM-1酶熱傳感器產(chǎn)生的電信號(hào)（上樣時(shí)上樣緩沖液與配置抗生素的緩沖液一致），并記錄反應(yīng)數(shù)據(jù)。每個(gè)反應(yīng)做3次重復(fù)。2.3.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用GraphPadPrism5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P值<0.05被認(rèn)定為兩組間差異顯著。P<0.05、P<0.01、P<0.001分別用*、**、***進(jìn)行表示。2.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.4.1NDM-1酶柱的制備結(jié)果成功的制備了固相有NDM-1酶的酶柱，并以該酶柱組裝酶熱傳感器成為NDM-1酶熱傳感器。圖2.1比較NDM-1酶熱傳感器Fig.2.1TheNDM-1thermalsensor

比較NDM-1酶熱傳感器與青霉素酶酶熱傳感器對(duì)六種不同抗生素的水解反應(yīng)活性標(biāo)準(zhǔn)曲線


本文編號(hào)：2930541