研究背景與目的乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）感染是一個(gè)重大的公共衛(wèi)生問題,全世界約有2.48億人感染HBV,其慢性感染可導(dǎo)致一系列嚴(yán)重的肝臟疾病,包括肝纖維化（liver fibrosis）,肝硬化（liver cirrhosis,LC）和肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）。HBV具有種屬特異性和組織特異性,同時(shí)還具有高復(fù)制和高突變率特性,其常見的基因突變位點(diǎn)為基礎(chǔ)核心啟動(dòng)子（Basic Core Promoter,BCP）區(qū)的1762（A1762T）和1764（G1764A）及前核心（Pre-Core,PC）區(qū)的1896（G1896A）和1899（G1899A）。體外實(shí)驗(yàn)或臨床樣本研究已發(fā)現(xiàn),BCP/PC聯(lián)合突變會(huì)阻斷或降低HBeAg表達(dá),然而,BCP/PC聯(lián)合突變對(duì)HBV表型的更多影響尚未報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)在前期BCP/PC聯(lián)合突變（BCP/PC（M））小鼠模型的基礎(chǔ)上,建立回復(fù)突變（BCP/PC（R））慢性乙型肝炎小鼠模型,通過(guò)對(duì)比分析研究BCP/PC聯(lián)合突變對(duì)HBV主要標(biāo)志物表型、機(jī)體免疫表型的影響,為臨床診斷和探討B(tài)CP... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

大小片段擴(kuò)增結(jié)果

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文25圖1.2BspQI酶切pEASY-HBV/BCP/PC（R）質(zhì)粒。泳道1：5000bpMarker；泳道2：BspQI酶切pEASY-HBV/BCP/PC（R）質(zhì)粒；泳道3：pEASY-HBV/BCP/PC（M）質(zhì)粒陽(yáng)性對(duì)照。Fig1.2pEASY-HBV/BCP/PC（R）plasmidwasdigestedbyBspQIrestrictionenzyme.Lane1:5000bpMarker;Lane2:plasmidwasdigestedbyBspQIrestrictionenzyme;Lane3:pEASY-HBV/BCP/PC（M）plasmidpositivecontrol.3.1.3Sanger測(cè)序測(cè)序結(jié)果表明四個(gè)位點(diǎn)回復(fù)突變成功，pEASY-BCP/PC（R）HBV質(zhì)粒構(gòu)建成功。3.2cccDNA的鑒定3.2.1酶切鑒定EcoRI酶切鑒定cccDNA，結(jié)果如圖1.3所示。由于HBV基因組含有EcoRI的酶切位點(diǎn)，因此線狀HBV可被EcoRI酶切消化成兩個(gè)DNA片段，環(huán)狀的DNA被EcoRI酶切消化后只產(chǎn)生一條鏈狀的線性HBV。

cccDNA的鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：2929916