梔子苷抑制巨噬源性泡沫細(xì)胞形成的機(jī)制研究
發(fā)布時間：2020-12-20 00:31
動脈粥樣硬化（Atherosclerosis,AS）是一種由膽固醇含量非常豐富的巨噬細(xì)胞在動脈壁異常積聚所致脂質(zhì)代謝不均衡和適應(yīng)性免疫反應(yīng)的復(fù)雜慢性炎癥性疾病。主動脈內(nèi)膜下巨噬細(xì)胞逐步泡沫化不僅是動脈粥樣硬化的關(guān)鍵因素之一,也是其發(fā)病的早期標(biāo)志。抑制泡沫化進(jìn)程可以防治AS發(fā)展的觀點已得到學(xué)界廣泛共識。梔子苷（Geniposide,Gen）是茜草科植物梔子的成熟果實中提取的主要藥用成分之一,已知梔子苷具有抗AS的作用,但是其機(jī)制尚不清楚。本文主要研究了梔子苷能否通過抑制泡沫細(xì)胞的形成而發(fā)揮其動脈粥樣硬化的防治作用,并闡明其可能分子機(jī)制。我們使用LPA處理Raw264.7細(xì)胞使其泡沫化,建立了穩(wěn)定的泡沫細(xì)胞模型。通過指定濃度劑量的梔子苷處理Raw264.7細(xì)胞后,CCK-8法檢測細(xì)胞活力。通過細(xì)胞總膽固醇檢測試劑盒和油紅O染色比較梔子苷處理前后對巨噬源性泡沫細(xì)胞的形成的抑制情況。通過WB和RT-PCR等技術(shù)檢測脂質(zhì)轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白及mRNA表達(dá)水平,并進(jìn)一步探討其可能機(jī)制。此外,以高脂飼料飼養(yǎng)ApoE-/-小鼠16周,而構(gòu)建了動物AS模型。在后四周以不同劑量的梔子苷治療A...
【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市
【文章頁數(shù)】：62 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
LPA誘導(dǎo)Raw264.7泡沫細(xì)胞的形成
重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文21圖2.梔子苷濃度梯度對Raw264.7巨噬細(xì)胞存活率的影響。Fig.2.EffectsofgeniposideconcentrationgradientonsurvivalrateofRaw264.7macrophages.注：NS表示沒有統(tǒng)計學(xué)差異（p>0.05）。2.3梔子苷劑量依賴性地抑制巨噬源性泡沫細(xì)胞的形成。動脈血管內(nèi)膜中巨噬源性泡沫細(xì)胞的形成是動脈粥樣硬化病變早期的主要標(biāo)志[9]。為了研究子苷對泡沫細(xì)胞形成的潛在影響，將Raw264.7巨噬細(xì)胞用LPA處理及不同濃度的梔子苷（50、100、200μg/ml）處理24h。然后對Raw264.7細(xì)胞進(jìn)行油紅O染色和總膽固醇酯/膽固醇定量測定。如圖3A和3B所示，與對照組相比，梔子苷治療組Raw264.7細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)滴的數(shù)量呈現(xiàn)劑量依賴性地顯著減少。如圖3C所示，通過細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯測定實驗表明，用梔子苷處理后，與對照組相比細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯明顯減少�？傊�，這些結(jié)果表明，梔子苷劑量依賴性地有效抑制Raw264.7巨噬源性泡沫細(xì)胞的形成。在后續(xù)的實驗中我們將進(jìn)一步探究梔子苷抑制巨噬源性泡沫細(xì)胞形成的可能機(jī)制。
重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文22圖3.梔子苷以劑量依賴性方式抑制泡沫細(xì)胞的形成。（A）通過油紅O染色觀察梔子苷處理對細(xì)胞內(nèi)脂滴的影響。（B）油紅O染色的定量分析。（C）梔子苷處理對細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯的量的影響。(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001)Fig.3.Geniposideinhibitstheformationoffoamcellsinadose-dependentmanner.Raw264.7macrophageswasexposedto200mMLPAfor24hinthepresenceorabsenceofdifferentconcentrationsof50,100or200μg/mlgeniposide.(A)Raw264.7cellswerestainedwithOilRedO.(B)QuantificationofoilredOstaining.(C)Thecholesterol/cholesterolesterassaywasmeasured.(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001)2.4梔子苷對Raw264.7巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白表達(dá)的影響�？紤]到梔子苷能夠有效的抑制泡沫細(xì)胞的形成，我們進(jìn)一步研究了梔子苷對于膽固醇轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白ABCG1、ABCA1和清道夫受體SR-A、CD36及SR-B1的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)的影響。如圖4A和4B所示，與僅用LPA誘導(dǎo)的Raw264.7巨噬細(xì)胞泡沫化模型組相比，梔子苷治療組中SR-A的mRNA水平明顯下調(diào)，ABCA1和SR-B1的mRNA水平上調(diào)。而ABCG1/CD36的mRNA水平均無明顯
本文編號：2926854
【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市
【文章頁數(shù)】：62 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
LPA誘導(dǎo)Raw264.7泡沫細(xì)胞的形成
重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文21圖2.梔子苷濃度梯度對Raw264.7巨噬細(xì)胞存活率的影響。Fig.2.EffectsofgeniposideconcentrationgradientonsurvivalrateofRaw264.7macrophages.注：NS表示沒有統(tǒng)計學(xué)差異（p>0.05）。2.3梔子苷劑量依賴性地抑制巨噬源性泡沫細(xì)胞的形成。動脈血管內(nèi)膜中巨噬源性泡沫細(xì)胞的形成是動脈粥樣硬化病變早期的主要標(biāo)志[9]。為了研究子苷對泡沫細(xì)胞形成的潛在影響，將Raw264.7巨噬細(xì)胞用LPA處理及不同濃度的梔子苷（50、100、200μg/ml）處理24h。然后對Raw264.7細(xì)胞進(jìn)行油紅O染色和總膽固醇酯/膽固醇定量測定。如圖3A和3B所示，與對照組相比，梔子苷治療組Raw264.7細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)滴的數(shù)量呈現(xiàn)劑量依賴性地顯著減少。如圖3C所示，通過細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯測定實驗表明，用梔子苷處理后，與對照組相比細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯明顯減少�？傊�，這些結(jié)果表明，梔子苷劑量依賴性地有效抑制Raw264.7巨噬源性泡沫細(xì)胞的形成。在后續(xù)的實驗中我們將進(jìn)一步探究梔子苷抑制巨噬源性泡沫細(xì)胞形成的可能機(jī)制。
重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文22圖3.梔子苷以劑量依賴性方式抑制泡沫細(xì)胞的形成。（A）通過油紅O染色觀察梔子苷處理對細(xì)胞內(nèi)脂滴的影響。（B）油紅O染色的定量分析。（C）梔子苷處理對細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯的量的影響。(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001)Fig.3.Geniposideinhibitstheformationoffoamcellsinadose-dependentmanner.Raw264.7macrophageswasexposedto200mMLPAfor24hinthepresenceorabsenceofdifferentconcentrationsof50,100or200μg/mlgeniposide.(A)Raw264.7cellswerestainedwithOilRedO.(B)QuantificationofoilredOstaining.(C)Thecholesterol/cholesterolesterassaywasmeasured.(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001)2.4梔子苷對Raw264.7巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白表達(dá)的影響�？紤]到梔子苷能夠有效的抑制泡沫細(xì)胞的形成，我們進(jìn)一步研究了梔子苷對于膽固醇轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白ABCG1、ABCA1和清道夫受體SR-A、CD36及SR-B1的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)的影響。如圖4A和4B所示，與僅用LPA誘導(dǎo)的Raw264.7巨噬細(xì)胞泡沫化模型組相比，梔子苷治療組中SR-A的mRNA水平明顯下調(diào)，ABCA1和SR-B1的mRNA水平上調(diào)。而ABCG1/CD36的mRNA水平均無明顯
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