關(guān)于朊蛋白通過(guò)激活NF-κB影響炎癥反應(yīng)的研究
發(fā)布時(shí)間：2020-12-18 23:56
既往研究表明細(xì)胞朊蛋白（Prion Protein,PrP）可能參與腫瘤的形成、轉(zhuǎn)移和化學(xué)耐藥性同時(shí),PrP在調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)中也可能起重要作用。本課題通過(guò)硫酸葡聚糖鈉鹽（Dextran Sulfate Sodium,DSS）誘導(dǎo)結(jié)腸炎相關(guān)的結(jié)腸癌模型,研究了在野生型小鼠（WT）、朊蛋白敲除型小鼠(PrP-/-)以及朊蛋白過(guò)表達(dá)型小鼠（Tga20）三種基因型小鼠中,PrP對(duì)腫瘤發(fā)生和炎癥的影響,并探索了PrP在NF-κB激活過(guò)程中的作用。本課題首先采用口服1.5%DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎相關(guān)的結(jié)腸癌模型,比較了三種基因型小鼠的體重變化百分比和腫瘤數(shù)目。通過(guò)HE染色比較三種基因型小鼠的組織活性指數(shù)（Histological Activity Index,HAI）及應(yīng)用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄PCR（Reverse Transcription quantitative PCR,RT-qPCR）比較三種基因型小鼠結(jié)腸組織中炎癥因子的表達(dá)。用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）處理三種基因型小鼠骨髓源性巨噬細(xì)胞（Bone marrow-derived macrophages,...
【文章來(lái)源】：華東師范大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
1：NF-κB蛋白家族成員圖[64]
華東師范大學(xué)2020級(jí)碩士學(xué)位論文8圖1.3.2：激活NF-κB的經(jīng)典和非經(jīng)典途經(jīng)[64]1.3.3NF-κB在炎癥中的作用NF-κB控制著數(shù)百個(gè)重要的生物學(xué)基因的表達(dá)，其亞基在調(diào)節(jié)細(xì)胞功能，細(xì)胞死亡和存活以及增殖中都具有重要作用。并且在控制免疫應(yīng)答的基因中，NF-κB具有非常重要的生理意義。在絕大多數(shù)細(xì)胞中，NF-κB的亞基p65包含主要的NF-κB轉(zhuǎn)錄活性，也是唯一的一個(gè)缺失會(huì)導(dǎo)致胚胎致死率的NF-κB的亞基，它負(fù)責(zé)大量促炎性介質(zhì)的表達(dá)，這些介質(zhì)通過(guò)先天免疫細(xì)胞，T細(xì)胞和B細(xì)胞來(lái)促進(jìn)白細(xì)胞募集[68,69]。同時(shí)，p65在繼發(fā)性淋巴器官發(fā)育中也具有重要作用。RelB的主要形式是p50和p52的異源二聚體[64]，RelB缺乏小鼠表現(xiàn)出嚴(yán)重的炎性表型，包括在多個(gè)器官中的T細(xì)胞浸潤(rùn)、炎性皮炎、依賴(lài)T細(xì)胞的骨髓增生和脾腫大[70]。此外，RelB缺乏小鼠還表現(xiàn)出繼發(fā)性淋巴器官的發(fā)育受阻現(xiàn)象[71]。RelB對(duì)于邊緣區(qū)的正常發(fā)育及其通過(guò)巨噬細(xì)胞和B細(xì)胞的浸潤(rùn)是必不可少的[72]。已有研究表明了c-Rel
華東師范大學(xué)2020級(jí)碩士學(xué)位論文18變性：94℃2min；擴(kuò)增：94℃30s；62℃30s；30×循環(huán)退火延伸：72℃1min；72℃10min；4.PCR反應(yīng)程序完成之后在20μl體系中加4μl6×DNALoadingBuffer，混合均勻后取10μl到1%瓊脂糖凝膠中，140V，35min電泳后用ChemiDox呈像儀在紫外通道下拍照分析；3.1.21.5%DSS結(jié)直腸癌模型給藥方案及組織處理（一）八周1.5%DSS結(jié)直腸癌模型給藥方案1.選取WT，PrP-/-，Tga20三種基因型八周齡以上雄鼠，只數(shù)分別為8、8、10，并將其稱(chēng)重；2.將DSS溶解于水中配制1.5%DSS；3.建立八周的1.5%DSS結(jié)直腸癌模型如下圖（圖3.1.2.1）：第0周將小鼠的正常飲水換成含1.5%DSS的飲用水，之后正常飲水兩周，第三周將小鼠的正常飲水換成含1.5%DSS的飲用水，之后正常飲水兩周，第六周將小鼠的正常飲水換成含1.5%DSS的飲用水，第七周正常飲水，第八周處死采集樣本（下圖給藥方案黑色框?yàn)榻o藥時(shí)間，白色框?yàn)檎ｏ嬎畷r(shí)間，白色箭頭為處死時(shí)間點(diǎn)）；圖3.1.2.1：八周1.5%DSS結(jié)直腸癌模型給藥圖
本文編號(hào)：2924842
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1：NF-κB蛋白家族成員圖[64]
華東師范大學(xué)2020級(jí)碩士學(xué)位論文8圖1.3.2：激活NF-κB的經(jīng)典和非經(jīng)典途經(jīng)[64]1.3.3NF-κB在炎癥中的作用NF-κB控制著數(shù)百個(gè)重要的生物學(xué)基因的表達(dá)，其亞基在調(diào)節(jié)細(xì)胞功能，細(xì)胞死亡和存活以及增殖中都具有重要作用。并且在控制免疫應(yīng)答的基因中，NF-κB具有非常重要的生理意義。在絕大多數(shù)細(xì)胞中，NF-κB的亞基p65包含主要的NF-κB轉(zhuǎn)錄活性，也是唯一的一個(gè)缺失會(huì)導(dǎo)致胚胎致死率的NF-κB的亞基，它負(fù)責(zé)大量促炎性介質(zhì)的表達(dá)，這些介質(zhì)通過(guò)先天免疫細(xì)胞，T細(xì)胞和B細(xì)胞來(lái)促進(jìn)白細(xì)胞募集[68,69]。同時(shí)，p65在繼發(fā)性淋巴器官發(fā)育中也具有重要作用。RelB的主要形式是p50和p52的異源二聚體[64]，RelB缺乏小鼠表現(xiàn)出嚴(yán)重的炎性表型，包括在多個(gè)器官中的T細(xì)胞浸潤(rùn)、炎性皮炎、依賴(lài)T細(xì)胞的骨髓增生和脾腫大[70]。此外，RelB缺乏小鼠還表現(xiàn)出繼發(fā)性淋巴器官的發(fā)育受阻現(xiàn)象[71]。RelB對(duì)于邊緣區(qū)的正常發(fā)育及其通過(guò)巨噬細(xì)胞和B細(xì)胞的浸潤(rùn)是必不可少的[72]。已有研究表明了c-Rel
華東師范大學(xué)2020級(jí)碩士學(xué)位論文18變性：94℃2min；擴(kuò)增：94℃30s；62℃30s；30×循環(huán)退火延伸：72℃1min；72℃10min；4.PCR反應(yīng)程序完成之后在20μl體系中加4μl6×DNALoadingBuffer，混合均勻后取10μl到1%瓊脂糖凝膠中，140V，35min電泳后用ChemiDox呈像儀在紫外通道下拍照分析；3.1.21.5%DSS結(jié)直腸癌模型給藥方案及組織處理（一）八周1.5%DSS結(jié)直腸癌模型給藥方案1.選取WT，PrP-/-，Tga20三種基因型八周齡以上雄鼠，只數(shù)分別為8、8、10，并將其稱(chēng)重；2.將DSS溶解于水中配制1.5%DSS；3.建立八周的1.5%DSS結(jié)直腸癌模型如下圖（圖3.1.2.1）：第0周將小鼠的正常飲水換成含1.5%DSS的飲用水，之后正常飲水兩周，第三周將小鼠的正常飲水換成含1.5%DSS的飲用水，之后正常飲水兩周，第六周將小鼠的正常飲水換成含1.5%DSS的飲用水，第七周正常飲水，第八周處死采集樣本（下圖給藥方案黑色框?yàn)榻o藥時(shí)間，白色框?yàn)檎ｏ嬎畷r(shí)間，白色箭頭為處死時(shí)間點(diǎn)）；圖3.1.2.1：八周1.5%DSS結(jié)直腸癌模型給藥圖
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