發(fā)布時(shí)間：2020-12-16 22:05

　　目的:宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）是與宮頸癌（CC）關(guān)系密切的一系列前驅(qū)病變。要研究CIN,必須要有一個(gè)穩(wěn)定良好的細(xì)胞模型。攜帶HPV16/E6E7病毒的永生化宮頸鱗狀細(xì)胞Ect1/E6E7模型可作為體外細(xì)胞模型進(jìn)行生物學(xué)研究。探討葉酸對Ect1/E6E7細(xì)胞生物學(xué)特征以及宮頸病變相關(guān)標(biāo)志物E-鈣粘蛋白（E-Cadherin）和波形蛋白（Vimentin）表達(dá)的影響,進(jìn)而分析葉酸對宮頸癌前病變的影響。方法:1.使用組織法、酶消法體外培養(yǎng)建立CIN細(xì)胞模型,利用免疫熒光技術(shù)進(jìn)行鑒定;2.常規(guī)培養(yǎng)宮頸永生化鱗狀細(xì)胞Ect1/E6E7,將Ect1/E6E7細(xì)胞株進(jìn)行復(fù)蘇,傳代實(shí)驗(yàn);3.葉酸濃度0、10、100、200、1000、2000nM分組分別干預(yù)Ect1/E6E7細(xì)胞24h、48h,用MTT法檢測葉酸對Ect1/E6E7細(xì)胞的抑制率,檢測不同濃度葉酸對Ect1/E6E7細(xì)胞增殖的影響;4.Western Blot檢測葉酸濃度0、10、100、200、1000、2000nM分組培養(yǎng)的Ect1/E6E7細(xì)胞中E-Cadherin、Vimentin的表達(dá)情況。結(jié)果:1.進(jìn)行的體外CIN細(xì)胞原代培... 

【文章來源】： 王卉 山西醫(yī)科大學(xué)

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

細(xì)胞的生長特點(diǎn)℃、濃度5%CO2、濕度95%的培養(yǎng)箱中，使用無血清的Ect1/E6E7細(xì)胞較宮頸癌細(xì)胞Siha、Hela

CK5CK14CK17CK19P632.3Ect1/E6E7細(xì)胞的生長特點(diǎn)Ect1/E6E7細(xì)胞在37K-SFM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，細(xì)胞長勢較好。生長慢，適宜條件下于T25態(tài)不一，核較大。山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文8DAPI圖1-1細(xì)胞的生長特點(diǎn)℃、濃度5%CO2、濕度95%的培養(yǎng)箱中，使用無血清的Ect1/E6E7細(xì)胞較宮頸癌細(xì)胞瓶培養(yǎng)，5天左右長滿瓶底，呈團(tuán)簇狀聚集MergeSiha、Hela天左右長滿瓶底，呈團(tuán)簇狀聚集生長，大小形

Q塅顄漄硃漄塂漄顁漄礎(chǔ)堿漄頾漄砽堼漄頻顊漄顊漄顊漄顊漄顊漄顊漄顊漄顊漄顊漄顊漄頺礪漄頸漄砷漄堶頵漄漄堳頲漄報(bào)漄砰堯漄ば漄は漄偮顊漄顊漄顊漄顊漄偭ね漄滅遫に懟遪偩遨と灧偦遙づS偤遣っ灢遠(yuǎn)だ偟悲肯?悱肳悴ヒ郍鴇烍ノ?鴇悔肍惐げ郟山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文14孔板，吸去培養(yǎng)基，分別加入10、100、20010ulMTT和90ulK-SFM多加一列即調(diào)零孔，做對照。將該96孔板置于37℃，5%CO2孵箱培養(yǎng)孔培養(yǎng)板，用移液槍吸棄培養(yǎng)基，分別加入110ul處各孔的吸光值OD；根據(jù)OD值計(jì)算葉酸對細(xì)胞的抑48h的細(xì)胞結(jié)果（圖2-1）。圖2-1MTT檢測細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線檢測各組相關(guān)蛋白的表達(dá)Ect1/E6E7細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，分于細(xì)胞和1200ul的K-SFM培養(yǎng)基，置于37孔板中細(xì)胞覆蓋率達(dá)80%~90%時(shí)，分別添加不同濃度葉酸RIPA：PMSF100:1），每孔加100ul，用刮匙充分刮取僞顫瘇、1000、2000nMSFM培養(yǎng)基，最后4h；的Formazan溶解細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，分于六孔板，每孔℃，5%CO2孵箱加不同濃度葉酸0、10、100、用刮匙充分刮取各


本文編號：2920856